【摘 要】
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研究构建了兔防御素基因NP-1的植物表达载体,NP-1由Ubiquitin启动子控制,含NPTⅡ基因和硝酸还原酶基因2个筛选标记。以椭圆小球藻(Chlorella ellipsoidea)硝酸还原酶缺失突变
【机 构】
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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室; 中国科学院遗传与发育生物学研究所分子农业研究中心;
【基金项目】
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国家高技术研究与发展计划(863)项目(No．2006AA22143);国家自然科学基金(No．30671193)资助。
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研究构建了兔防御素基因NP-1的植物表达载体,NP-1由Ubiquitin启动子控制,含NPTⅡ基因和硝酸还原酶基因2个筛选标记。以椭圆小球藻(Chlorella ellipsoidea)硝酸还原酶缺失突变体nrm-4为受体,采用原生质体转化的方法将目的基因NP-1转入该突变体中。用含G418的硝酸盐培养基筛选出阳性藻落,经PCR和RT-PCR检测,证明获得了转基因藻株。转基因藻株在无抗生素筛选压力的硝酸盐液体培养基上继代培养后进行抑菌活性检测。结果表明,转基因椭圆小球藻表达的NP—1具有正常的生物活性,并在无抗生素的培养基中稳定遗传。研究的结果为小球藻表达外源基因提供了新的技术途径,也使NP-1的规模化生产成为可能。
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