探讨多药耐药相关蛋白4（MRP4）基因过表达对脂多糖（LPS）诱导大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）渗透性的影响及其分子机制。
方法体外培养PMVECs细胞，待细胞传至3~6代后分为3组：LPS组无血清培养基培养24 h后，用10 μg/mL LPS刺激细胞；Ad-shRNA组用腺病毒空白载体转染细胞2 h，无血清培养基培养24 h后，用10 μg/mL LPS刺激细胞；Ad-MRP4组用携带MRP4的重组腺病毒载体转染细胞2 h，无血清培养基培养24 h后，用10 μg/mL LPS刺激细胞。于LPS刺激2、6、12、24 h采用Transwell小室法检测单层细胞渗透性；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞内环磷酸腺苷（cAMP）水平；激光共聚焦荧光显微镜下观察细胞内纤维型肌动蛋白（F-actin）形态及分布情况。于LPS刺激12 h收集细胞，采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测PMVECs中MRP4、β-连环蛋白（β-catenin）、血管内皮-钙黏蛋白（VE-cad）和紧密连接蛋白（ZO-1）的表达水平。
结果① LPS刺激后PMVECs细胞渗透性及细胞内cAMP水平逐渐增加，12 h达到高峰，24 h开始下降。用携带MRP4的重组腺病毒载体转染PMVECs后，细胞渗透性较LPS组及Ad-shRNA组显著增加〔12 h渗透性（A值）：1.88±0.06比1.12±0.17、1.10±0.18〕，细胞内cAMP水平显著降低〔12 h cAMP（μg/L）：2.39±0.02比2.97±0.01、3.00±0.02，均P<0.05〕；而LPS组与Ad-shRNA组各时间点各指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。②激光共聚焦荧光显微镜下显示，3组细胞均出现F-actin重构、应力纤维形成，但Ad-MRP4组细胞破坏程度较LPS组和Ad-shRNA组更加严重。③与LPS组和Ad-shRNA组比较，Ad-MRP4组PMVECs中MRP4蛋白表达显著上调（灰度值：0.76±0.03比0.44±0.02、0.43±0.02，均P<0.05），β-catenin、VE-cad和ZO-1蛋白表达显著下调〔β-catenin（灰度值）：0.14±0.03比0.23±0.04、0.23±0.03；VE-cad（灰度值）：0.21±0.01比0.34±0.02、0.35±0.04；ZO-1（灰度值）：0.14±0.02比0.37±0.06、0.33±0.07，均P<0.05〕；而LPS组与Ad-shRNA组间各蛋白表达差异无统计学意义（均P>0.05）。
结论MRP4基因过表达可降低细胞内cAMP水平，下调细胞间连接蛋白表达，从而增加LPS诱导的血管内皮渗透性。