【摘 要】
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目的构建针对肝癌衍生生长因子(HDGF)基因的siRNA表达载体,建立稳定干扰HDGF基因表达的肺腺癌细胞株,检测干扰效率。方法实时荧光定量PCR比较肺腺癌细胞株SPC-A-1、10例肺腺
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目的构建针对肝癌衍生生长因子(HDGF)基因的siRNA表达载体,建立稳定干扰HDGF基因表达的肺腺癌细胞株,检测干扰效率。方法实时荧光定量PCR比较肺腺癌细胞株SPC-A-1、10例肺腺癌组织和其配对的癌旁肺组织HDGF基因表达差异。构建shRNA-HDGF慢病毒表达载体,测序鉴定序列的正确性。随后用脂质体的方法将载体转染入肺腺癌细胞株SPC-A-1中,经杀稻瘟菌素筛选后,稳定表达siRNA-HDGF的细胞株单克隆细胞株建立。实时荧光定量PCR检测干扰效率,筛选干扰效率最高的细胞株。结果HDGF基因在腺癌细胞株SPC-A-1和肺腺癌组织明显高表达。测序证实,构入慢病毒载体中shRNA序列正确。一共筛选了5个siRNA-HDGF细胞株。与对照载体和单纯细胞株相比,最高干扰HDGF表达的效率为75%。结论HDGF基因在肺腺癌细胞株及肺癌组织中高表达;针对HDGF的siRNA慢病毒表达载体成功构建;在其导入肺腺癌细胞株后能稳定干扰HDGF基因的表达。
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