【摘 要】
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目的 建立KIF4A核糖核酸内切酶Ⅲ酶切制备的小分子干扰RNA(esiRNA)文库,并探讨这种新型siRNA制备方法的优势.方法 制备502 bp的KIF4A基因组序列作为转录模板；体外转录获得双链
【机 构】
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天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室,泰山医学院附属医院
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目的 建立KIF4A核糖核酸内切酶Ⅲ酶切制备的小分子干扰RNA(esiRNA)文库,并探讨这种新型siRNA制备方法的优势.方法 制备502 bp的KIF4A基因组序列作为转录模板；体外转录获得双链RNA；用核糖核酸内切酶ⅢGST融合蛋白(GST-RNaseⅢ)酶切双链RNA,制备KIF4A esiRNA文库；应用KIF4A esiRNA和化学合成的KIF4A siRNA转染胃癌细胞株SGC-7901,应用Q-RT PCR和WesternBlot分别检测KIF4A的mRNA和蛋白水平.结果 利用GST-RNaseⅢ成功制备了KIF4A esiRNA文库,该文库可有效抑制SGC-7901细胞内的KIF4A表达,且抑制效果明显优于化学合成的KIF4A siRNA.结论 用生物学方法制备的KIF4A esiRNA文库可有效抑制KIF4A在细胞内的表达,且抑制效果优于化学合成的siRNA.
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