【摘 要】
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目的通过过表达或沉默磷酸肌醇4磷酸(PI4P)在人脑胶质瘤细胞U87中，了解PI4P对人脑胶质瘤U87细胞侵袭迁移的影响，探索PI4P在人脑胶质瘤发展过程中的作用机制。方法采用LV-Helper1、LV-Helper2、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-shPI4P包装pWPXLd-PI4P及pLL3.7-shPI4P慢病毒；pWPXLd-puro、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-Scr
【机 构】
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目的通过过表达或沉默磷酸肌醇4磷酸(PI4P)在人脑胶质瘤细胞U87中，了解PI4P对人脑胶质瘤U87细胞侵袭迁移的影响，探索PI4P在人脑胶质瘤发展过程中的作用机制。
方法采用LV-Helper1、LV-Helper2、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-shPI4P包装pWPXLd-PI4P及pLL3.7-shPI4P慢病毒；pWPXLd-puro、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-Scramble、pLL3.7-shPI4P慢病毒侵染U87细胞，构建U87-GFP(过表达PI4P细胞系对照组/A1组)、U87-GFP-PI4P(过表达PI4P细胞系实验组/A2组)、U87-Scramble(沉默PI4P细胞系对照组/B1组)、U87-shPI4P(沉默PI4P细胞系实验组/B2组)细胞系；应用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的影响；免疫印迹实验检测PI4P及RhoA的表达水平。
结果成功包装了pWPXLd-puro、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-Scramble、pLL3.7-shPI4P慢病毒；构建了U87-GFP(过表达PI4P细胞系对照组)、U87-GFP-PI4P(过表达PI4P细胞系实验组)、U87-Scramble(沉默PI4P细胞系对照组)、U87-shPI4P(沉默PI4P细胞系实验组)细胞系；过表达PI4P后，U87-GFP-PI4P细胞系侵袭个数为(197.69±2.08)个，而U87-GFP系侵袭个数为(120.00±2.64)个，迁移个数分别为(70.00±0.58)、(50.00±1.02)个；沉默PI4P后，U87-shPI4P细胞系及U87-Scramble细胞系的侵袭个数分别是(79.67±1.53)、(117.00±2.00)，迁移个数分别为(19.33±2.08)、(46.67±1.52)个，过表达PI4P后侵袭迁移能力明显增强(t＝39.960, P＝0.000；t＝33.150，P＝0.000)，沉默PI4P后，U87细胞侵袭迁移能力显著减弱(t＝25.700, P＝0.000；t＝18.340，P＝0.000)；过表达PI4P后，RhoA表达水平升高(t＝17.270，P＝0.000)，沉默PI4P后RhoA蛋白表达水平降低(t＝35.120，P＝0.000)。
结论在人脑胶质瘤U87细胞中，PI4P通过调节RhoA蛋白表达水平，调节人脑胶质瘤U87细胞的侵袭迁移，为脑胶质瘤的基础研究及临床治疗提供新的研究及治疗靶点。
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