IMS—qPCR检测水源性微小隐孢子虫方法的建立

来源 :中国寄生虫学与寄生虫病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nj84219
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目的将免疫磁珠分离技术(IMS)和荧光探针定量PCR(qPCR)相结合,建立水源性微小隐孢子虫卵囊的检测方法。方法以抗微小隐孢子虫卵囊表面抗原Cp23单克隆抗体包被链霉素磁珠.制备特异免疫磁珠.根据卵囊回收率优化分离和富集卵囊条件。根据微小隐孢子虫核糖体DNA小亚基(18SrDNA)基因(登录号AB513881.1)序列设计引物和荧光标记探针.以分离纯化后的微小隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板进行扩增,将扩增产物克隆至Peasy—T1载体。经筛选鉴定后.将重组质粒倍比稀释至104--108copy/μl,荧
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