【摘 要】
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目的 观察miRNA干扰沉默乙酰肝素酶(HPA)基因表达对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭和迁移的影响.方法 根据人HPA基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,同时合成1对阴性对照质粒表
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目的 观察miRNA干扰沉默乙酰肝素酶(HPA)基因表达对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭和迁移的影响.方法 根据人HPA基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,同时合成1对阴性对照质粒表达载体.采用阳离子脂质体转染法将以上质粒转染入人胆囊癌GBC-SD细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后HPA mRNA表达的变化,选出对HPA沉默效果最佳的质粒,使用抗生素Blasticidin 2 mg/L加压筛选阳性克隆并扩增培养传代,获得稳定表达细胞株,供下一步实验.通过划痕损伤实验和Transwell小室细胞侵袭、迁移实验检测干扰沉默HPA表达后对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭和迁移能力的影响.结果 质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-HPA-2沉默人胆囊癌GBC-SD细胞HPA mRNA表达的效果最好.pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-HPA-2组中穿过ranswell小室基质的胆囊癌GBC-SD细胞数明显低于阴性对照组(P＜0.05)和空白对照组.胆囊癌GBC-SD细胞的迁移距离在0、12、24 h pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-HPA-2组明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论 miRNA干扰沉默人胆囊癌GBC-SD细胞中HPA mRNA表达,从而抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的侵袭和迁移能力.
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