【摘 要】
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目的研究人自噬相关基因3(ATG3)过表达对乳腺癌细胞自噬及盐霉素诱导细胞凋亡的影响和机制。方法采用慢病毒的方法,构建了稳定过表达ATG3的乳腺癌MCF-7细胞株;通过Western bl
【机 构】
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湖南环境生物职业技术学院化学教研室,湖南省乳甲疾病防治临床医学研究中心,南华大学附属第二医院临床研究所
【基金项目】
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湖南省自然科学基金(2018JJ3462);湖南省卫生健康委科研计划(B2019107)
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目的研究人自噬相关基因3(ATG3)过表达对乳腺癌细胞自噬及盐霉素诱导细胞凋亡的影响和机制。方法采用慢病毒的方法,构建了稳定过表达ATG3的乳腺癌MCF-7细胞株;通过Western blotting、免疫荧光和透射电镜等方法分析了ATG3过表达对乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响;并用AKT/mTOR的激动剂(SC79和MHY1485)分析AKT/mTOR信号通路对ATG3过表达促进细胞自噬的影响;通过Western blotting和流式细胞术,同时结合盐霉素和自噬抑制剂(3-MA),分析了自噬对ATG3过表达抑制盐霉素诱导细胞凋亡的影响。结果成功构建稳定高表达ATG3的MCF-7细胞株。ATG3能够促进MCF-7细胞自噬,并且抑制AKT/mTOR信号通路。ATG3明显抑制了盐霉素诱导的细胞凋亡(P<0.01),且ATG3过表达组中促凋亡分子cleaved-caspase 3(P<0.01)和Bax表达明显减少(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增多(P<0.05)。自噬的阻滞能够削弱ATG3对盐霉素诱导细胞凋亡的抑制作用。结论 ATG3可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬,并通过细胞自噬减少盐霉素诱导的细胞凋亡。综上提示诱发细胞自噬可能是乳腺癌细胞耐药的机制之一。
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