【摘 要】
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为建立稳定表达犬瘟热病毒(CDV)受体,即信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的BHK-21细胞系,本研究将重组表达质粒pDisplay-SLAM转染于BHK-21细胞,通过G418压力筛选并结合有限稀释法
【机 构】
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东北农业大学动物医学学院; 沈阳市动物疫病防控中心;
【基金项目】
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国家科技支撑计划(2012BAD12B03、2012BAD12B05)
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为建立稳定表达犬瘟热病毒(CDV)受体,即信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的BHK-21细胞系,本研究将重组表达质粒pDisplay-SLAM转染于BHK-21细胞,通过G418压力筛选并结合有限稀释法、免疫荧光、RT-PCR和western blot筛选出稳定表达SLAM的阳性细胞(BHK-21/SLAM)。病毒感染试验结果显示,CDV在BHK-21细胞中无细胞病变(CPE)产生,而感染BHK-21/SLAM细胞12 h后即可出现CPE;BHK-21/SLAM细胞培养物上清液中的CDV核酸含量于24 h达到最高值(107.9拷贝/μL),明显高于对照组BHK-21细胞培养物上清液中的核酸含量(106.28拷贝/μL)。研究结果表明,与BHK-21细胞相比较,CDV在BHK-21/SLAM细胞中的病毒核酸含量更高,并能够产生明显的CPE。该细胞系的建立在CDV的分离、生物学特性研究和疫苗毒生产等方面具有良好应用前景。
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