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【中图分类号】R372 【文献标识码】B【文章编号】1632-5281（2014）09
【摘要】目的研究义齿软衬试件白假丝酵母菌（C.a）粘附的影响因素。方法三种软衬试件分为实验组和对照组（根据是否覆盖唾液薄膜），菌落技术法测定组间C.a的粘附量有无差别；接触角测量仪测定并计算表面自由能，分析表面自由能与C.a的粘附间有无相关性。结果三种试件覆盖唾液薄膜后C.a粘附量减少（P<0.05）；试件的表面自由能与C.a粘附间有正相关关系（rs=0.525，P<0.05）。结论唾液薄膜对试件C.a的粘附有抑制作用；试件表面自由能越高C.a粘附量越多。
【关键词】白假丝酵母菌；软衬；唾液；表面自由能
义齿软衬材料能有效缓解义齿修复后软组织压痛、提高基托与牙槽嵴粘膜的密合性，临床应用广泛。但由于其特殊的表面结构和理化性能易发生微生物的附着与定植，易引起义齿性口炎等疾病[1]。白假丝酵母菌（Candia albicans，C.a）是口腔中最常见的条件致病菌，与义齿性口炎的发生密切相关[2]。软衬材料C.a的粘附可能受多种因素影响，其中唾液薄膜、表面自由能与C.a粘附间的关系尚不明确[2]。本实验选取三种丙烯酸酯类的软衬材料，分析唾液薄膜及表面自由能对C.a粘附的影响，旨在更好的指导临床应用，改善义齿佩戴者的健康状况。
1材料与方法
1.1材料和设备
自凝软衬垫（上海齿科材料厂）；FD SOFT（日本龟水工业株式会社）；Physio Liner（日进齿科）
超净工作台，隔水式电热恒温培养箱，比浊仪，超声清洗器，视频光学接触角测量仪，高速离心机，沙保氏固体和液体培养基，PBS缓冲液，C.a标准株菌种（C.a（ATCC10231））
1.2实验方法
1.2.1试件和菌液制备
三种软衬材料制成光滑度相同的试件各15个（10mm*10mm*2mm）。超声振荡清洗，紫外线消毒。
C.a菌种接种于灭菌后的沙保氏固体培养基，恒温37℃培养48h，挑取单个菌落接种于沙保氏液体培养基，制成107-108 CFU/ml数量级的实验菌液。
1.2.2 C.a体外粘附、接种和菌落计数
采集未刺激的全唾液离心后取上清液。三种试件各取10个分实验组和对照组。实验组15个试件分别置于1ml唾液中浸泡30分钟后取出，PBS缓冲液清洗。对照组15个试件做空白对照。
试件分别置于1ml实验菌液中，恒温培养48小时后取出，PBS缓冲液清洗10次，分别放入5mlPBS缓冲液中，超声振荡将原液倍比稀释为1/10000，取稀释液50μl接种于沙保氏固体培养基上培养48小时进行菌落计数。
1.2.3测定表面自由能
三种试件各取5个，用蒸馏水和二碘甲烷作为测试液，测定试件的静态接触角（θ），计算试件的表面自由能、极性分量和色散分量。
1.3统计分析
使用SPSS17.0软件进行统计分析，α=0.05。实验组和对照组两指标比较均采用成组设计的t检验；采用Spearman相关分析表面自由能与C.a粘附间的相关性。
2结果
实验组与对照组相比，C.a的粘附量差别均有统计学意义（P<0.05），说明唾液薄膜对试件C.a的粘附有影响，能抑制C.a的粘附。
研究试件的表面自由能、极性分量、色散分量与C.a粘附间的相关性，相关系数rs为0.525、0.331、0.538，P均小于0.05，认为试件的表面自由能（包括色散分量）与C.a粘附间有正相关关系，极性分量则无关。
3 讨论
修复材料用于口腔内很快在表面形成一层唾液薄膜，微生物与材料粘附时首先是与这层薄膜粘附；同时粘附后的微生物也是时刻浸泡在唾液中。唾液薄膜对软衬材料C.a粘附影响的研究是有争议的[2]。造成结果多样化的原因例如：具体的实验方法有差异；唾液成分的不同可能影响唾液薄膜的成分以及形成。临床研究表明[2]，唾液流量低以及唾液成分改变的患者，口腔内C.a数目较正常人增多，这也体现了唾液在抑制C.a粘附方面的作用。
固体的表面自由能与其润湿性能密切相关，是物体表面分子间作用力的体现。本实验选用蒸馏水和二碘甲烷作为测试液，测定接触角后计算表面自由能。表面自由能对修复体表面菌斑粘附和滞留有重要影响。本实验中表面自由能（包括色散分量）与C.a的粘附间呈正相关关系。这提示，降低软衬材料的表面自由能可能成为减少C.a粘附的一个手段。
综上，对于临床上由于局部或全身疾病造成唾液量减少、唾液成分改变的患者，例如糖尿病或者舍格伦综合征的患者，他们唾液保护功能降低，应特别注意选用细菌粘附量少的软衬材料，尽量选用热凝软衬材料，甚至考虑换用其他修复方式。在新材料研发过程中，可以考虑对软衬材料进行表面改性以降低表面自由能从而减少C.a的粘附，从而更有利于患者的口腔健康。
参考文献
[1]Skupien J A，Valentini F，Boscato N，et al.Prevention and treatment of Candida colonization on denture liners：A systematic review[J].The Journal of prosthetic dentistry，2013，110（5）：356-362.
[2]Salerno C，Pascale M，Contaldo M，et al.Candida-associated denture stomatitis[J].Med Oral Patol Oral Cir Bucal，2011，16（2）：139-143.
【摘要】目的研究义齿软衬试件白假丝酵母菌（C.a）粘附的影响因素。方法三种软衬试件分为实验组和对照组（根据是否覆盖唾液薄膜），菌落技术法测定组间C.a的粘附量有无差别；接触角测量仪测定并计算表面自由能，分析表面自由能与C.a的粘附间有无相关性。结果三种试件覆盖唾液薄膜后C.a粘附量减少（P<0.05）；试件的表面自由能与C.a粘附间有正相关关系（rs=0.525，P<0.05）。结论唾液薄膜对试件C.a的粘附有抑制作用；试件表面自由能越高C.a粘附量越多。
【关键词】白假丝酵母菌；软衬；唾液；表面自由能
义齿软衬材料能有效缓解义齿修复后软组织压痛、提高基托与牙槽嵴粘膜的密合性，临床应用广泛。但由于其特殊的表面结构和理化性能易发生微生物的附着与定植，易引起义齿性口炎等疾病[1]。白假丝酵母菌（Candia albicans，C.a）是口腔中最常见的条件致病菌，与义齿性口炎的发生密切相关[2]。软衬材料C.a的粘附可能受多种因素影响，其中唾液薄膜、表面自由能与C.a粘附间的关系尚不明确[2]。本实验选取三种丙烯酸酯类的软衬材料，分析唾液薄膜及表面自由能对C.a粘附的影响，旨在更好的指导临床应用，改善义齿佩戴者的健康状况。
1材料与方法
1.1材料和设备
自凝软衬垫（上海齿科材料厂）；FD SOFT（日本龟水工业株式会社）；Physio Liner（日进齿科）
超净工作台，隔水式电热恒温培养箱，比浊仪，超声清洗器，视频光学接触角测量仪，高速离心机，沙保氏固体和液体培养基，PBS缓冲液，C.a标准株菌种（C.a（ATCC10231））
1.2实验方法
1.2.1试件和菌液制备
三种软衬材料制成光滑度相同的试件各15个（10mm*10mm*2mm）。超声振荡清洗，紫外线消毒。
C.a菌种接种于灭菌后的沙保氏固体培养基，恒温37℃培养48h，挑取单个菌落接种于沙保氏液体培养基，制成107-108 CFU/ml数量级的实验菌液。
1.2.2 C.a体外粘附、接种和菌落计数
采集未刺激的全唾液离心后取上清液。三种试件各取10个分实验组和对照组。实验组15个试件分别置于1ml唾液中浸泡30分钟后取出，PBS缓冲液清洗。对照组15个试件做空白对照。
试件分别置于1ml实验菌液中，恒温培养48小时后取出，PBS缓冲液清洗10次，分别放入5mlPBS缓冲液中，超声振荡将原液倍比稀释为1/10000，取稀释液50μl接种于沙保氏固体培养基上培养48小时进行菌落计数。
1.2.3测定表面自由能
三种试件各取5个，用蒸馏水和二碘甲烷作为测试液，测定试件的静态接触角（θ），计算试件的表面自由能、极性分量和色散分量。
1.3统计分析
使用SPSS17.0软件进行统计分析，α=0.05。实验组和对照组两指标比较均采用成组设计的t检验；采用Spearman相关分析表面自由能与C.a粘附间的相关性。
2结果
实验组与对照组相比，C.a的粘附量差别均有统计学意义（P<0.05），说明唾液薄膜对试件C.a的粘附有影响，能抑制C.a的粘附。
研究试件的表面自由能、极性分量、色散分量与C.a粘附间的相关性，相关系数rs为0.525、0.331、0.538，P均小于0.05，认为试件的表面自由能（包括色散分量）与C.a粘附间有正相关关系，极性分量则无关。
3 讨论
修复材料用于口腔内很快在表面形成一层唾液薄膜，微生物与材料粘附时首先是与这层薄膜粘附；同时粘附后的微生物也是时刻浸泡在唾液中。唾液薄膜对软衬材料C.a粘附影响的研究是有争议的[2]。造成结果多样化的原因例如：具体的实验方法有差异；唾液成分的不同可能影响唾液薄膜的成分以及形成。临床研究表明[2]，唾液流量低以及唾液成分改变的患者，口腔内C.a数目较正常人增多，这也体现了唾液在抑制C.a粘附方面的作用。
固体的表面自由能与其润湿性能密切相关，是物体表面分子间作用力的体现。本实验选用蒸馏水和二碘甲烷作为测试液，测定接触角后计算表面自由能。表面自由能对修复体表面菌斑粘附和滞留有重要影响。本实验中表面自由能（包括色散分量）与C.a的粘附间呈正相关关系。这提示，降低软衬材料的表面自由能可能成为减少C.a粘附的一个手段。
综上，对于临床上由于局部或全身疾病造成唾液量减少、唾液成分改变的患者，例如糖尿病或者舍格伦综合征的患者，他们唾液保护功能降低，应特别注意选用细菌粘附量少的软衬材料，尽量选用热凝软衬材料，甚至考虑换用其他修复方式。在新材料研发过程中，可以考虑对软衬材料进行表面改性以降低表面自由能从而减少C.a的粘附，从而更有利于患者的口腔健康。
参考文献
[1]Skupien J A，Valentini F，Boscato N，et al.Prevention and treatment of Candida colonization on denture liners：A systematic review[J].The Journal of prosthetic dentistry，2013，110（5）：356-362.
[2]Salerno C，Pascale M，Contaldo M，et al.Candida-associated denture stomatitis[J].Med Oral Patol Oral Cir Bucal，2011，16（2）：139-143.