【摘 要】
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目的制备针对多囊蛋白1(PC1)胞外区的抗体,为分析PC1胞外区生物特性和功能提供工具。方法根据生物信息学分析结果,PCR扩增编码小鼠Pkd1的氨基端474E-640L的cDNA片段。将该片
【机 构】
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北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院,
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目的制备针对多囊蛋白1(PC1)胞外区的抗体,为分析PC1胞外区生物特性和功能提供工具。方法根据生物信息学分析结果,PCR扩增编码小鼠Pkd1的氨基端474E-640L的cDNA片段。将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上,在IPTG诱导下产生小鼠Pkd1抗原(mPkd1-N)。纯化浓缩目的蛋白并制备兔抗PC1氨基端多克隆抗体(mPkd1-Np),并以Westernblot法、免疫组化以及免疫荧光方法分析该兔抗PC1氨基端抗体的特异性。结果成功地构建了mPkd1-N片段真核及原核表达载体,在大肠杆菌中实现表达,并制备了抗小鼠PC1氨基端的多克隆抗体mPkd1-Np。通过生化和细胞学方法证实了该抗体针对PC1的特异性。结论成功制备了高效价、特异性的兔抗mPkd1-Np多克隆抗体。
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