【摘 要】
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目的 建立亲水相互作用色谱-三重四极杆质谱法(HILIC-MS/MS)同时测定肝素及硫酸乙酰肝素经肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ酶切后产生的双糖含量,为肝素及硫酸乙酰肝素的鉴别提供方法 和数
【机 构】
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山东大学齐鲁医学院药学院生化与生物技术药物研究所 化学生物学教育部重点实验室,山东 济南250012;山东省糖化学与糖生物学重点实验室,国家糖工程技术研究中心,山东 济南250012
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目的 建立亲水相互作用色谱-三重四极杆质谱法(HILIC-MS/MS)同时测定肝素及硫酸乙酰肝素经肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ酶切后产生的双糖含量,为肝素及硫酸乙酰肝素的鉴别提供方法 和数据参考.方法 采用PC HILIC色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以10 mmol/L乙酸铵-水溶液(A)、10 mmol/L乙酸铵-90％乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速0.9 mL/min,柱温40℃,进样量10μL,采用电喷雾电离源、负离子多反应检测模式对肝素及硫酸乙酰肝素酶切后产生的8种双糖进行定量,比较二者的差异.结果 所测成分在测定摩尔浓度范围内线性关系良好(r2>0.9960),平均加样回收率为90.34％～99.62％,RSD为4.7％～6.7％,样品测定结果 显示肝素与硫酸乙酰肝素双糖组成及比例差异明显.肝素中占比最大的双糖为ΔUA2S-GlcNS6S(TriS),约69.8％;硫酸乙酰肝素中占比最大的双糖为ΔUA-GlcNAc(0S),约51.0％.结论 该法灵敏度高、稳定性好,简单快捷、准确可靠,可作为肝素与硫酸乙酰肝素的鉴别方法 之一.
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