羰基还原酶的克隆、异源表达及其在(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯合成中的应用

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(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯是合成血管紧张素转换酶抑制剂类降压药的关键手性中间体.筛选了 1株具有不对称还原2-氧代-4-苯基丁酸乙酯合成(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯活性的野生菌DY99,经鉴定此菌为Kazachstania naganishii.从该菌基因组序列中挖掘并克隆了发挥催化活性的羰基还原酶基因,构建了重组大肠杆菌E.coli-pET28-kncr,对其诱导表达条件和催化反应条件进行了优化,并在最适条件下进行了催化反应.结果发现:在最优条件(当OD600达到0.8时,添加乳糖6 g/L,在28℃、150 r/min诱导12 h)下,重组菌酶活达到330.61 U/L发酵液.确定了全细胞催化不对称还原2-氧代-4-苯基丁酸乙酯制备(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的最适反应条件为30℃,pH7.5,底物、葡萄糖、细胞生物量分别为15、15和20 g/L(以干质量计),在最适反应条件下,产物累积量、时空产率分别为11.2 g/L和26.88 g/(L-h),产物的对映体过量值(e.e.)>99%,显示了良好的应用前景.
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利用2018年10月~2020年12月彭州边界层铁塔的风速风向观测资料,分析了彭州地区近地面各季节平均风速日变化、盛行风向及污染系数特征,在此基础上,选取彭州大风天气个例,对按月分类法和风速区间法的反演结果进行了有效性验证.结果表明:除夏季10m高度盛行西风以外,其余三季各高度均盛行东北风,秋冬两季各高度东北风出现频率大于春夏两季,每个季节随着高度增加,东北风出现频率均逐渐增大,对应平均风速均逐渐增大.春夏季10m高度的最大污染系数在偏西方向,其他各高度最大污染系数均在东北方向,各层高度最小污染系数多在东
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