【摘 要】
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目的构建幽门螺杆菌(Hp)Vac A基因片段原核表达载体并进行表达.方法采用PCR技术,扩增Hp vac A基因的1个片段B,并克隆入pGEM-3Zf(-)质粒.测序正确后,再克隆入质粒pRSETA中,构
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目的构建幽门螺杆菌(Hp)Vac A基因片段原核表达载体并进行表达.方法采用PCR技术,扩增Hp vac A基因的1个片段B,并克隆入pGEM-3Zf(-)质粒.测序正确后,再克隆入质粒pRSETA中,构建重组表达载体pILSE-TA-B.结果经过转化层 E.coil BL21 DE3(plysS)后,诱导表达出相对分子质量(Mr)为33 000的蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达量占全菌总蛋白质的47.8%,上清中目的蛋白占全菌总蛋白的10.9%.ELISA和Western blot分析表明,表达蛋白能与兔抗Vac A多抗结合.结论成功地构建原核表达载体pRSETA-B,为进一步探讨该片段的生物学活性,以及临床上通过检测患者血清预测Hp的感染提供了实验依据.
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