目的优化检测人血浆蛋白α1-蛋白酶抑制剂(α1-protease inhibitor,α1-PI)活性的弹性蛋白酶动态显色法,并进行验证。方法以微量滴定板为载体,将不同浓度的α1-PI与特定量的猪胰弹性蛋白酶(porcine pancreaselastase,PPE)混合,测定剩余的弹性蛋白酶催化特定底物的强度,判定样品中α1-PI的含量,通过比较不同浓度酶和底物的组合中标准曲线的线性范围,确定最佳反应条件。对优化的动态显色法进行准确度、精密度验证,并确定标准曲线的线性范围。采用优化后的方法对α1-PI制备工艺进行监控,并筛选冻干配方。结果 PPE与底物的浓度选择分别为0.2 U/ml和1.2 mg/ml。该方法检测α1-PI的线性范围在2~14μg/ml之间,r>0.99。各浓度样品检测结果的CV均<4%,回收率在99.4%~104.3%之间,准确性较好;同一样品由同一个实验员在同一试验中连续测定6次的CV为1.8%,同一样品由不同的实验员在不同日期内分别测定3次的CV为1.8%,重复性较好。纯化工艺过程中各样品比活均符合《欧洲药典》规定的>0.7,总回收率为62.9%;筛选出可较好保护α1-PI活性的配方。结论优化后的弹性蛋白酶动态显色法可用于工艺样品中α1-PI活性的检测。