【摘 要】
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目的 构建苏云金杆菌AiiA基因的真核表达载体并转染A549细胞,观测真核细胞表达的AiiA蛋白对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,tgiaosa,Pa)密度感应(quorum sensing)系统
【机 构】
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华中科技大学问济医学院附属同济医院呼吸内科
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目的 构建苏云金杆菌AiiA基因的真核表达载体并转染A549细胞,观测真核细胞表达的AiiA蛋白对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,tgiaosa,Pa)密度感应(quorum sensing)系统酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactone,AHL)信号分子及毒力因子合成的影响.方法 质粒pET-AiiA经Nhe Ⅰ与Xho Ⅰ酶切后,将AiiA基因片段连接入真核表达质粒pEGFP-N2,脂质体转染A549细胞,提取细胞蛋白,Western blot检测AiiA蛋白表达.将蛋白提取物加入Pa培养物中,观察Pa AHL信号分子及毒力因子绿脓素、弹性蛋白酶的生成情况.结果 AiiA基因片段成功克隆入真核表达质粒pEGFP-N2,转染该质粒后的A549细胞能够表达AiiA蛋白,且该蛋白能够降低Pan培养物中AHL信号分子水平,且绿脓素和弹性蛋白酶的牛成减少.结论 本研究成功构建了真核表达质粒pEGFP-N2-AiiA,转染细胞后表达的AiiA蛋白能够水解AHL信号分子,减少Pa毒力因子的生成,故具有抗Pa感染的潜在价值.
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