【摘 要】
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青枯菌5号生理小种(Ralstonia solanacearum race 5)是引发桑青枯病的病原菌.为了改进常规PCR方法不能对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的不足,建立叠氮溴化丙锭(PMA)预处
【机 构】
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江苏科技大学,江苏镇江,212003;江苏科技大学,江苏镇江 212003;中国农业科学院蚕业研究所,江苏镇江212018
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青枯菌5号生理小种(Ralstonia solanacearum race 5)是引发桑青枯病的病原菌.为了改进常规PCR方法不能对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的不足,建立叠氮溴化丙锭(PMA)预处理结合荧光定量PCR(qPCR)检测青枯菌5号生理小种活菌的方法.该方法首先将待检测样品的痛原菌细胞用质量浓度为15 ng/μL的PMA暗孵育10 min后,在卤钨灯下曝光5min,以消除死菌细胞DNA的PCR扩增信号.用PMA-qPCR方法对含青枯菌5号生理小种活菌和死菌的混合样本的检测结果表明,死菌的存在不会对活菌细胞DNA的扩增产生影响.建立的PMA-qPCR标准曲线显示,在菌液浓度为103～107CFU/mL的范围内,qPCR循环阈值(D)与菌液浓度的对数值之间呈良好的线性关系,线性方程为y=-3.477x+47.489,R2=0.997.建立的PMA-qPCR方法能更为准确地检测复杂样本中的青枯菌5号生理小种活菌数量,有助于对桑树青枯病的早期诊断和及时制定病害防控措施.
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