【摘 要】
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目的 探究线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)释放在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)增殖中的作用及可能机制.方法 ①1％O2缺氧处理RPASMCs分3组(n=3):常氧组、缺氧24h组、缺氧48 h组.②环孢素A(CsA)抑制线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)分为3组(n=3):常氧组、缺氧48 h组
【机 构】
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400038重庆,陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原特需药品与器材研究室;400038重庆,陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系极端环境医学教育部重点实验室;400038重庆,陆军军
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目的 探究线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)释放在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)增殖中的作用及可能机制.方法 ①1％O2缺氧处理RPASMCs分3组(n=3):常氧组、缺氧24h组、缺氧48 h组.②环孢素A(CsA)抑制线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)分为3组(n=3):常氧组、缺氧48 h组、缺氧48 h+CsA处理组.③siRNA敲低干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)表达分为3组(n=3):常氧+NC组、缺氧48 h+NC组、缺氧48 h+si-STING组.④采用CCK-8检测细胞增殖,RT-qPCR、Western blot检测环状GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)、STING、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的基因与蛋白表达,qPCR检测细胞质mtDNA释放,ELISA检测细胞培养上清中CXC趋化因子配体10(C-X-C motif chemokine ligand 10,CXCL1O)水平.结果 缺氧可诱导RPASMCs释放mtDNA(P＜0.01),显著上调cGAS、STING、PCNA的表达(P＜0.05),并增强CXCL10的分泌(P＜0.01),进而促进RPASMCs增殖(0.44±0.02vs0.72±0.03)(P＜0.05).抑制MPTP可阻断mtDNA释放(P＜0.01),显著下调cGAS、STING、PCNA的表达(P＜0.01),降低CXCL10的分泌水平(P＜0.01),并显著抑制缺氧诱导的RPASMCs增殖(0.74±0.12 vs0.43±0.06)(P＜0.01).敲低STING可显著下调PCNA的表达(P＜0.05),降低CXCL10的分泌水平(P＜0.01),并显著抑制缺氧诱导的RPASMCs增殖(0.68±0.03 vs0.58±0.01)(P＜0.01).结论 缺氧可诱导平滑肌细胞释放mtDNA,介导缺氧诱导的平滑肌细胞增殖,其机制可能与cGAS-STING通路的激活有关.
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