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【目的】探明贵州省烟草主产区马铃薯Y病毒（PVY）的主要株系,为制定烟草PVY的综合防治策略提供理论依据。【方法】采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）对从贵州省24个县（市）48个乡（镇）采集到的254份烟草病毒病疑似样品进行检测,每个乡镇选出一个代表性PVY阳性样品运用生物学方法并依据pl基因和cp基因序列联合分析鉴定PVY株系。【结果】源于贵州省24个县（市）的48个烟草PVY分离物与已知PVY分离物的p1基因和cp基因的核苷酸相似性在84.1%-98.6%,氨基酸序列同源性为86.1%