【摘 要】
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目的 获得高纯度和具有生物活性的重组肠毒素B(rTcdB).方法 以艰难梭状芽孢杆菌染色体DNA为模板,通过PCR方法扩增得到全长TcdB基因并克隆至穿梭载体pHis1522.构建的质粒经直
【机 构】
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深圳市第三人民医院感染科,美国Tufts大学Cummings兽医学院
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目的 获得高纯度和具有生物活性的重组肠毒素B(rTcdB).方法 以艰难梭状芽孢杆菌染色体DNA为模板,通过PCR方法扩增得到全长TcdB基因并克隆至穿梭载体pHis1522.构建的质粒经直接测序验证无误后,转化巨大芽孢杆菌原生质体,在木糖的诱导作用下进行TcdB的表达、纯化及生物活性鉴定.结果 从细菌培养液中纯化得到rTcdB,浓度达到5～10 mg/L,其相对分子质量与天然的TcdB蛋白接近,生物活性与天然的TcdB蛋白相似.结论 在巨大芽孢杆菌中成功表达了具有完整结构和活性的艰难梭状芽孢杆菌TcdB重组蛋白.
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