【摘 要】
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CRISPR/Cas9基因编辑系统是植物基因功能研究的重要工具,月季TCP9基因可以调控花器官的发育,应用CRISPR/Cas9技术构建敲除月季TCP9基因的表达载体,可以为月季TCP9基因的调控
【机 构】
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湖南农业大学园艺园林学院; 湖南省中亚热带优质花木繁育与利用工程技术研究中心;
【基金项目】
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国家自然基金项目(31772352);国家科技基础资源调查专项(2017FY100100);国家重点硏发计划(2018YFD1000400);湖南省科技计划项目(2018TP2007);湖南省中亚热带花木繁育与利用工程技术中心建设项目(201809)共同资助
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CRISPR/Cas9基因编辑系统是植物基因功能研究的重要工具,月季TCP9基因可以调控花器官的发育,应用CRISPR/Cas9技术构建敲除月季TCP9基因的表达载体,可以为月季TCP9基因的调控机制提供更多信息。根据月季TCP9基因的保守序列,设计了一对互补引物,用T4连接酶连接到质粒载体pKSE402(该载体含有eGFP)中;通过测序确定所构建载体的正确性,通过冻融法将含有TCP9基因的重组质粒转入农杆菌(EHA105)中。以农杆菌为模板PCR扩增以及eGFP瞬时表达,结果表明月季TCP9基因敲除表达载体已构建成功。本研究表明了含有TCP9基因的表达载体能在植物中高效表达,为进一步研究提供了一定的科学依据。
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