论文部分内容阅读
目的 基因工程制备重组人Wnt10b蛋白,观察其促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达.方法 以pUC19-Wnt10b为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增cDNA,扩增产物和pEGFP-N1载体双酶切,连接酶连接构建pEGFP-N1-Wnt10b真核表达载体,酶切和测序鉴定该载体;LpofectamineTM 2000将该载体转染入COS-7细胞,计算转染率.Western blot和免疫细胞化学法检测COS-7细胞Wnt10b蛋白表达;将子鼠背部皮肤置于含Wnt10b蛋白的培养液中培养2d,Western blot法检测皮肤Wnt10b和β-连环蛋白的表达.结果 PCR扩增出的人Wnt10b基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体,成功构建pEGFP-N1-Wnt10b;pEGFP-N1-Wnt10b,成功转染COS-7细胞,转染率为20% ~ 40%,转染后COS-7细胞Wnt10b蛋白表达较对照组增加(P<0.05),COS-7细胞分泌的Wnt10b蛋白能促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达(P<0.05).结论 成功制备具有生物活性的重组人Wnt10b蛋白,Wnt10b蛋白促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达增加。