【摘 要】
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目的 利用巴氏毕赤酵母真核表达系统表达人核心蛋白聚糖DCN,并检测其抗肿瘤活性.方法 利用DCN的特异引物,通过RT-PCR扩增人DCN基因,与载体pPIC9K连接,将序列正确的重组体扩增
【机 构】
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山西医科大学微生物学与免疫学教研室
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目的 利用巴氏毕赤酵母真核表达系统表达人核心蛋白聚糖DCN,并检测其抗肿瘤活性.方法 利用DCN的特异引物,通过RT-PCR扩增人DCN基因,与载体pPIC9K连接,将序列正确的重组体扩增后,酶切线性化,通过醋酸锂法转化酵母菌HIS/GS115,G418筛选阳性克隆,用含1%甲醇的BMMY培养基诱导表达,并观察纯化的表达产物对人肝母细胞瘤细胞(HepG2)增殖的影响.结果 表达产物作用于HepG2细胞后,与对照组相比,细胞增殖数量及速度均显著降低.随着表达产物浓度的升高及作用时间的延长,抑制作用也增强,并表现出浓度和时间依赖性关系.细胞形态学观察表明DCN对HepG2生长有明显抑制作用.结论 已成功构建了pPICgK-DCN真核表达载体,并表达了有活性的蛋白产物.
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