【摘 要】
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[目的]构建人死亡结构域相关蛋白(hDaxx)的干扰载体,为研究hDaxx在HPV致宫颈癌发生与发展过程中的作用提供实验基础。[方法]以hDaxx全基因序列为模板,设计hDaxx RNA干扰引物
【机 构】
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南华大学病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(“人乳头瘤病毒16型E2蛋白对Daxx调控细胞凋亡的影响”,No.81402169);湖南省自然科学基金项目(“Daxx对人乳头瘤病毒16型E2蛋白转录调控E6和E7的影响”,No.2018JJ3452);特殊病原体防控湖南省重点实验室资助项目(湘科计字[2014]5号);湖南省分子靶标新药研究协同创新中心资助项目(湘教通[2015]351号)
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[目的]构建人死亡结构域相关蛋白(hDaxx)的干扰载体,为研究hDaxx在HPV致宫颈癌发生与发展过程中的作用提供实验基础。[方法]以hDaxx全基因序列为模板,设计hDaxx RNA干扰引物并扩增干扰片段,将其连接到pGPU6/GFP/Neo真核表达载体,构建pGPU6/GFP/Neo-SiDaxx干扰载体,转染至HeLa细胞,利用荧光显微镜观察转染效率以及通过RT-PCR、Western Blot检测siRNA对HeLa细胞中hDaxx表达的影响。[结果]在转染了pGPU6/GFP/Neo-Si Daxx载体的HeLa细胞中,其hDaxx mRNA和蛋白的表达水平与空载体对照组比较明显降低。[结论]成功构建了hDaxx的干扰载体pGPU6/GFP/Neo-Si Daxx,该干扰载体能抑制HeLa细胞中hDaxx mRNA基因和蛋白的表达。
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