【摘 要】
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目的:构建UCA1a(CUDR)基因真核表达载体pcDNA-UCA1a(CUDR),观察其在膀胱癌UM-UC-2细胞中的表达,为研究UCA1a(CUDR)基因与膀胱癌的关系提供实验依据。方法:以膀胱癌BLZ-211细
【机 构】
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陕西中医学院医学科研实验中心,西安交通大学医学院第一附属医院转化医学中心
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目的:构建UCA1a(CUDR)基因真核表达载体pcDNA-UCA1a(CUDR),观察其在膀胱癌UM-UC-2细胞中的表达,为研究UCA1a(CUDR)基因与膀胱癌的关系提供实验依据。方法:以膀胱癌BLZ-211细胞的5′-RACE-Ready cDNA为模板,采用PCR法克隆UCA1a(CUDR)全基因,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA-UCA1a(CUDR)重组质粒。双酶切及测序鉴定后,稳定转染至体外培养的人膀胱癌UM-UC-2细胞系,利用RT-PCR法检测转染pcDNA-UCA1a(CUDR)的UM-UC-2细胞和转染空质粒pcDNA3.1(+)的UM-UC-2细胞中UCA1a(CUDR)基因的表达。结果:克隆的目的基因片段约为2 200bp,与预期结果相符,表明成功扩增UCA1a(CUDR)基因;经双酶切及测序鉴定,成功构建真核表达载体pcDNA-UCA1a(CUDR)。半定量RT-PCR法检测,与转染空质粒的细胞比较,转染表达载体pcDNA-UCA1a(CUDR)的UM-UC-2细胞中UCA1a(CUDR)基因表达量升高。结论:成功构建pcDNA-UCA1a(CUDR)真核表达载体,且UCA1a(CUDR)基因在转染表达载体的UM-UC-2细胞中高表达。
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