【摘 要】
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为将无酶点击化学连接链式反应(CCLCR)结合试纸条用于金黄色葡萄球菌核酸的可视化检测。根据金黄色葡萄球菌16S rRNA的一段保守序列设计1对特异性核酸分子探针,一条探针5’端
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院; 军事医学科学院军事兽医研究所;
【基金项目】
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吉林省科技发展计划项目(20140101027JC,20150101105JC)
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为将无酶点击化学连接链式反应(CCLCR)结合试纸条用于金黄色葡萄球菌核酸的可视化检测。根据金黄色葡萄球菌16S rRNA的一段保守序列设计1对特异性核酸分子探针,一条探针5’端修饰生物素(Biotin),3’端修饰叠氮(N3);另一条探针5’端修饰环辛炔(DBCO),3’端修饰异硫氰酸荧光素(FITC),通过与目标基因进行特异性杂交,CCLCR和热循环作用下扩增产物进行试纸条分析。结果表明:CCLCR最佳探针浓度为0.05μmol/L,热循环扩增的最佳连接温度为25℃,该方法能够特异性检测出金黄色葡萄球菌核酸,而对肠炎沙门氏菌等其他5种食源性病原菌的检测结果呈阴性,同时对金黄色葡萄球菌核酸的检测灵敏度为1×10-8μmol/L。综上,将CCLCR与试纸条结合作为检测金黄色葡萄球菌的方法,具有操作简单、检测准确、检测成本低等优点,有望作为金黄色葡萄球菌的常规检测方法。
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