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目的 构建携带骨桥蛋白双链小干扰RNA(OPN-siRNA)的质粒表达载体,筛选出基因沉默效果最明显的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体.方法 设计并合成2个针对OPN的shRNA寡核苷酸片段(shRNA1,shRNA2),退火形成双链并分别克隆进入载体pGenesil-1.酶切鉴定后,采用LipofectamineTM2000介导的转染方法将重组的shRNA质粒转入大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),筛选出稳定转染株.采用RT-PCR及Western免疫印迹检测其对OPN表达的抑制效果.结果 shRNA质粒成功转染入VSMC且效率达50%以上.转染含OPN shRN A1的VSMC的OPN mRNA和蛋白的表达分别为0.16±0.04和0.30±0.09,含OPN shRNA2分别为0.23±0.06和0.44±0.06,两组之间及分别与正常细胞组比较差异均有统计学意义(P<0.01).空载体组和阴性对照组与正常细胞组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 成功构建了靶向OPN基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为shRN A1质粒。