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目的 探讨优化体外构建三维立体尿道组织的复合技术。方法高速振荡脱细胞法制备猪尿道海绵体脱细胞（ACSM）支架，碘消毒法进行复合前消毒，酶消化法分离及扩增兔舌黏膜上皮细胞和海绵体平滑肌细胞。采用3种复合技术进行细胞与ACSM的复合。A组（三明治复合组）：于ACSM尿道面及海绵体面分别静态接种两种细胞。B组（注射复合组）：将平滑肌细胞注射人ACSM内部并在尿道面静态接种舌黏膜上皮细胞。C组（动态复合组）：采用振荡法将平滑肌细胞接种于ACSM内部并在尿道面静态接种舌黏膜上皮细胞。体外培养14d以后行HE染色以检查复合效果。结果振荡脱细胞处理后ACSM的结构较脱细胞前更为疏松；碘消毒法在彻底消毒的同时能够最大限度的保留脱细胞支架的原有结构。复合支架体外培养14d后HE染色均可见有完整的上皮细胞层形成于支架表面。A组复合后平滑肌细胞仅在支架大间隙中可见。未见向深部浸润趋势。B组复合后平滑肌细胞成团分布于支架内，并受周围支架组织约束成局限化表现，仅5％～10％的细胞有向外生长倾向。C组HE染色可见平滑肌细胞均匀分布于支架内部，15％～20％的区域可见平滑肌成束生长。同时平滑肌层与支架表面的上皮细胞层分界清晰。结论高速振荡法制备的支架组织具有理想的三维空间结构，结合动态细胞复合技术可构建拥有良好立体结构的尿道组织。