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摘要：[目的] 建立高效液相色谱法测定通便和减肥类保健食品中主要功效成分决明子中橙黄决明素的含量。[方法] 色谱条件：采用C18柱，柱温30 ℃，检测波长284 nm，流速为1mL/min，乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）为流动相。[结果]橙黄决明素在0.040 2～0.321 6 μg（r=0.999 9）范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率为99.87%，RSD为1.32%。[结论]该试验所建立的方法准确、重现性好，可用于通便和减肥类保健食品的质量控制。
关键词保健食品；通便；减肥；橙黄决明素；高效液相色谱法
中图分类号O657.7文献标识码A文章编号0517-6611（2016）15-065-02
决明子在大多数通便和减肥类保健食品中作为主要原料被广泛使用，主要功效成分决明子为历版药典收载品种，为豆科植物决明（Cassia obtusifolia L.）或小决明（Cassia tora L.）的干燥成熟种子，具有润肠通便的功效[1]，其专属性成分为橙黄决明素[2]，还含有大黄酚、大黄素等多种成分。目前多采用高效液相色谱法测定决明子药材或中药中决明子的橙黄决明素、大黄酚、大黄素成分[1-8]，也有采用高效液相色谱法测定保健食品中蒽醌类成分[9-10]，鲜见同时对通便和减肥类保健食品中决明子橙黄决明素检测方法的文献报道。
笔者选取了以决明子为主要成分制成的4个通便类、6个减肥类保健食品进行检测，产品均为胶囊和茶的固体制剂。以对减肥胶囊产品中橙黄决明素含量测定的方法学研究为基础，建立了采用高效液相色谱法测定通便和减肥类保健食品的主要功效成分决明子中橙黄决明素含量的方法，为评估通便和减肥类保健食品的功效作用、安全性和质量控制提供参考。
1材料与方法
1.1材料Waters e2695型高效液相色谱仪、2998二极管阵列检测器；梅特勒 MS105DU电子天平；舒美KQ-500DA型数控超声波清洗器。橙黄决明素对照品，中国食品药品检定研究院，国家药品标准物质，批号：111900-201202；通便类保健食品产品4批：通便茶（A），润通茶（B），通秘茶（C），常润茶（D）；减肥类保健食品产品6批：减肥胶囊（E、F、G、H），减肥茶（I、J ）。乙腈为色谱纯；甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷等，均为分析纯；水为超纯水。
1.2方法
1.2.1标准溶液的制备。精密称定橙黄决明素标准物质0.010 05g，置10 mL容量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.0 mL混合液至100 mL容量瓶中，再加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合液稀释至刻度，摇匀，即得标准溶液（每1mL含橙黄决明素20.1 μg）。
1.2.2供试品溶液的制备。精密称取样品1.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，加稀盐酸30 mL，置水浴上加热水解1 h，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液使溶解，转移至25 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液，即得。
1.2.3色谱条件。十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Waters XBridgeTMC18；5 μm，4.6×250 mm）；乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）为流动相；柱温为30 ℃；检测波长为284 nm；进样量为5 μL。
1.2.4方法学考察。
1.2.4.1检测波长的确定。取标准溶液在190～400 nm范围内用二极管阵列检测器检测，标准溶液在284 nm处有最大吸收，因此该试验选用284 nm为检测波长。
1.2.4.2流动相的确定。橙黄决明素的含量测定方法目前主要是高效液相色谱法，根据文献[1]报道的方法进行研究并确定乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）为流动相，样品中的橙黄决明素峰和其他成分峰基线分离，分离效果良好。标准物质、供试品、溶剂色谱图分别见图1、2、3。
1.2.4.3线性关系考察。精密吸取标准溶液注入高效液相色谱仪中测定，以峰面积A对浓度C进行线性回归，考察两者的线性关系。
1.2.4.4精密度试验。取标准溶液，连续进样6次，记录峰面积，考察仪器精密度。
1.2.4.5重复性试验。按“1.2.2”项下供试品溶液制备方法处理6份供试品溶液，测定，考察试验的重复性。
1.2.4.6加样回收率试验。精密称取供试品0.5 g，共6份，分别精密加入橙黄决明素标准溶液（20.1 μg/mL）3mL，再按“1.2.2”项下供试品溶液制备方法处理，测定，计算回收率。
1.2.4.7稳定性试验。取供试品溶液，分别在0、1、2、4、8、12、16 h进样，记录峰面积，考察试验的稳定性。
2结果与分析
2.1线性关系考察按“1.2.4.3”项的方法得出，标准溶液标准曲线方程Y=26 917X-6 618.5，r=0.999 9。结果表明，橙黄决明素在0.040 2～0.321 6 μg范围内线性关系良好。
2.2精密度试验按“1.2.4.4”项的方法得出，峰面积RSD值为0.33%，表明仪器精密度良好。
2.3重复性试验按“1.2.4.5”项的方法得出，6份供试品溶液的橙黄决明素，平均含量为107.31 μg/g，RSD为0.79%，重复性良好。
2.4加样回收率试验试验得出，含供试品的平均回收率为99.87%，RSD为1.32%，方法回收率良好。 2.5稳定性试验按“1.2.4.7”项的方法得出，峰面积值的RSD值为0.28%，供试品溶液在16 h内稳定。
2.6样品橙黄决明素含量测定分别取10个品种供试品的内容物1.0 g，精密称定，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算供试品中橙黄决明素含量测定结果分别为A：73.5 μg/g； B：13.6 μg/g； C：15.6 μg/g；D：18.8 μg/g；E：109.7 μg/g；F：77.3 μg/g；G：88.6 μg/g；H：9.3 μg/g；I：21.1 μg/g；J：6.2 μg/g。测定结果表明，通便类保健食品中橙黄决明素的含量范围为13.6～73.5 μg/g，减肥类保健食品中橙黄决明素的含量为9.3～109.7 μg/g，含量差异均较大。
3结论与讨论
决明子为通便和减肥类保健食品的主要功效成分之一，橙黄决明素为决明子的专属性成分，根据相关文献方法[1-9]，选用乙醇、甲醇等溶剂进行超声及回流提取橙黄决明素，并对提取溶剂、提取方法、提取时间、酸水解时间、水解酸浓度、水解温度和萃取次数进行考察。该试验研究确定了70%甲醇回流提取2 h，10%HCl水解1 h，三氯甲烷萃取4次供试品处理方法，建立了通便和减肥类保健食品中橙黄决明素含量的HPLC测定法，方法简便可行并具有良好的准确性和重现性，可用于通便和减肥类保健食品的质量控制。
该试验对通便类、减肥类保健食品10个样品中橙黄决明素含量进行了测定。检测结果表明，通便类、减肥类保健食品中橙黄决明素含量相差最大超过10倍。分析原因认为，由于现有保健食品质量标准存在处方备注不全、未明确处方量、无生产工艺或生产工艺不完整等情况，主要功效成分决明子等原材料的投料缺乏有效监控措施，部分生产企业如未严格按照生产工艺生产产品，是造成不能有效控制产品质量的主要因素，需要予以规范和完善，在产品质量标准中明确成分、处方量和主要生产工艺，确定功效成分指标和检测方法，并加强生产工艺监管力度，保障产品质量和使用安全。同时，需要评价其处方量的合理性，评估功效作用和安全性；防止使用者在无明确标示含量情况下长期大量服用对身体造成的损害，其潜在安全风险[10]有关监管部门应予以关注。
参考文献
[1]
国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010版[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2] 黄小平，钟国跃，张雪梅，等.HPLC法测定决明子中大黄酚和橙黄决明素[J].中国中药杂志，2010，35（16）：2065-2067.
[3] 何晓文，樊淑彦，付炎，等.脂降宁片中丹参素、绿原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黄决明素的HPLC法测定[J].中国工业医药杂志，2011，42（8）：625.
[4] 戴迎春，邓楠，刘文，等.决明子中橙黄决明素的提取、分离及纯化方法的研究[J].中国药学，2011，9（3）：179-182.
[5] 祖若玉，曹冬梅，蔡亚兰.HPLC法同时测定明珠口服液中大黄酚和橙黄决明素的含量[J].航天航空医学杂志，2014，25（7）：925.
[6] 卫莹芳，谢达温，万丽，等.HPLC梯度洗脱法同时测定决明子中橙黄决明素、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚的含量[J].中国食品卫生杂志，2009，11（6）：868-871.
[7] 詹雁，阮佳，谭镭，等.UPLC同时测定决明子中橙黄决明素、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚的含量[J].中国测试，2013，39（2）：56-58.
[8] 晏亮，龚千峰，陈伟康.高效液相色谱法测定参芪十一味颗粒中橙黄决明素和大黄酚的含量[J].海峡药学，2014，26（11）：58-60.
[9] 肖晶，杨杰，高尚伟，等.HPLC法测定保健食品中蒽醌类成分的含量[J].中国食品卫生杂志，2010，22（1）：27-30.
[10] 邹义英，李军生.决明子类保健食品的潜在安全风险分析[J].食品科技，2009，34（5）：295-297.
关键词保健食品；通便；减肥；橙黄决明素；高效液相色谱法
中图分类号O657.7文献标识码A文章编号0517-6611（2016）15-065-02
决明子在大多数通便和减肥类保健食品中作为主要原料被广泛使用，主要功效成分决明子为历版药典收载品种，为豆科植物决明（Cassia obtusifolia L.）或小决明（Cassia tora L.）的干燥成熟种子，具有润肠通便的功效[1]，其专属性成分为橙黄决明素[2]，还含有大黄酚、大黄素等多种成分。目前多采用高效液相色谱法测定决明子药材或中药中决明子的橙黄决明素、大黄酚、大黄素成分[1-8]，也有采用高效液相色谱法测定保健食品中蒽醌类成分[9-10]，鲜见同时对通便和减肥类保健食品中决明子橙黄决明素检测方法的文献报道。
笔者选取了以决明子为主要成分制成的4个通便类、6个减肥类保健食品进行检测，产品均为胶囊和茶的固体制剂。以对减肥胶囊产品中橙黄决明素含量测定的方法学研究为基础，建立了采用高效液相色谱法测定通便和减肥类保健食品的主要功效成分决明子中橙黄决明素含量的方法，为评估通便和减肥类保健食品的功效作用、安全性和质量控制提供参考。
1材料与方法
1.1材料Waters e2695型高效液相色谱仪、2998二极管阵列检测器；梅特勒 MS105DU电子天平；舒美KQ-500DA型数控超声波清洗器。橙黄决明素对照品，中国食品药品检定研究院，国家药品标准物质，批号：111900-201202；通便类保健食品产品4批：通便茶（A），润通茶（B），通秘茶（C），常润茶（D）；减肥类保健食品产品6批：减肥胶囊（E、F、G、H），减肥茶（I、J ）。乙腈为色谱纯；甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷等，均为分析纯；水为超纯水。
1.2方法
1.2.1标准溶液的制备。精密称定橙黄决明素标准物质0.010 05g，置10 mL容量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.0 mL混合液至100 mL容量瓶中，再加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合液稀释至刻度，摇匀，即得标准溶液（每1mL含橙黄决明素20.1 μg）。
1.2.2供试品溶液的制备。精密称取样品1.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，加稀盐酸30 mL，置水浴上加热水解1 h，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液使溶解，转移至25 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液，即得。
1.2.3色谱条件。十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Waters XBridgeTMC18；5 μm，4.6×250 mm）；乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）为流动相；柱温为30 ℃；检测波长为284 nm；进样量为5 μL。
1.2.4方法学考察。
1.2.4.1检测波长的确定。取标准溶液在190～400 nm范围内用二极管阵列检测器检测，标准溶液在284 nm处有最大吸收，因此该试验选用284 nm为检测波长。
1.2.4.2流动相的确定。橙黄决明素的含量测定方法目前主要是高效液相色谱法，根据文献[1]报道的方法进行研究并确定乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）为流动相，样品中的橙黄决明素峰和其他成分峰基线分离，分离效果良好。标准物质、供试品、溶剂色谱图分别见图1、2、3。
1.2.4.3线性关系考察。精密吸取标准溶液注入高效液相色谱仪中测定，以峰面积A对浓度C进行线性回归，考察两者的线性关系。
1.2.4.4精密度试验。取标准溶液，连续进样6次，记录峰面积，考察仪器精密度。
1.2.4.5重复性试验。按“1.2.2”项下供试品溶液制备方法处理6份供试品溶液，测定，考察试验的重复性。
1.2.4.6加样回收率试验。精密称取供试品0.5 g，共6份，分别精密加入橙黄决明素标准溶液（20.1 μg/mL）3mL，再按“1.2.2”项下供试品溶液制备方法处理，测定，计算回收率。
1.2.4.7稳定性试验。取供试品溶液，分别在0、1、2、4、8、12、16 h进样，记录峰面积，考察试验的稳定性。
2结果与分析
2.1线性关系考察按“1.2.4.3”项的方法得出，标准溶液标准曲线方程Y=26 917X-6 618.5，r=0.999 9。结果表明，橙黄决明素在0.040 2～0.321 6 μg范围内线性关系良好。
2.2精密度试验按“1.2.4.4”项的方法得出，峰面积RSD值为0.33%，表明仪器精密度良好。
2.3重复性试验按“1.2.4.5”项的方法得出，6份供试品溶液的橙黄决明素，平均含量为107.31 μg/g，RSD为0.79%，重复性良好。
2.4加样回收率试验试验得出，含供试品的平均回收率为99.87%，RSD为1.32%，方法回收率良好。 2.5稳定性试验按“1.2.4.7”项的方法得出，峰面积值的RSD值为0.28%，供试品溶液在16 h内稳定。
2.6样品橙黄决明素含量测定分别取10个品种供试品的内容物1.0 g，精密称定，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算供试品中橙黄决明素含量测定结果分别为A：73.5 μg/g； B：13.6 μg/g； C：15.6 μg/g；D：18.8 μg/g；E：109.7 μg/g；F：77.3 μg/g；G：88.6 μg/g；H：9.3 μg/g；I：21.1 μg/g；J：6.2 μg/g。测定结果表明，通便类保健食品中橙黄决明素的含量范围为13.6～73.5 μg/g，减肥类保健食品中橙黄决明素的含量为9.3～109.7 μg/g，含量差异均较大。
3结论与讨论
决明子为通便和减肥类保健食品的主要功效成分之一，橙黄决明素为决明子的专属性成分，根据相关文献方法[1-9]，选用乙醇、甲醇等溶剂进行超声及回流提取橙黄决明素，并对提取溶剂、提取方法、提取时间、酸水解时间、水解酸浓度、水解温度和萃取次数进行考察。该试验研究确定了70%甲醇回流提取2 h，10%HCl水解1 h，三氯甲烷萃取4次供试品处理方法，建立了通便和减肥类保健食品中橙黄决明素含量的HPLC测定法，方法简便可行并具有良好的准确性和重现性，可用于通便和减肥类保健食品的质量控制。
该试验对通便类、减肥类保健食品10个样品中橙黄决明素含量进行了测定。检测结果表明，通便类、减肥类保健食品中橙黄决明素含量相差最大超过10倍。分析原因认为，由于现有保健食品质量标准存在处方备注不全、未明确处方量、无生产工艺或生产工艺不完整等情况，主要功效成分决明子等原材料的投料缺乏有效监控措施，部分生产企业如未严格按照生产工艺生产产品，是造成不能有效控制产品质量的主要因素，需要予以规范和完善，在产品质量标准中明确成分、处方量和主要生产工艺，确定功效成分指标和检测方法，并加强生产工艺监管力度，保障产品质量和使用安全。同时，需要评价其处方量的合理性，评估功效作用和安全性；防止使用者在无明确标示含量情况下长期大量服用对身体造成的损害，其潜在安全风险[10]有关监管部门应予以关注。
参考文献
[1]
国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010版[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2] 黄小平，钟国跃，张雪梅，等.HPLC法测定决明子中大黄酚和橙黄决明素[J].中国中药杂志，2010，35（16）：2065-2067.
[3] 何晓文，樊淑彦，付炎，等.脂降宁片中丹参素、绿原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黄决明素的HPLC法测定[J].中国工业医药杂志，2011，42（8）：625.
[4] 戴迎春，邓楠，刘文，等.决明子中橙黄决明素的提取、分离及纯化方法的研究[J].中国药学，2011，9（3）：179-182.
[5] 祖若玉，曹冬梅，蔡亚兰.HPLC法同时测定明珠口服液中大黄酚和橙黄决明素的含量[J].航天航空医学杂志，2014，25（7）：925.
[6] 卫莹芳，谢达温，万丽，等.HPLC梯度洗脱法同时测定决明子中橙黄决明素、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚的含量[J].中国食品卫生杂志，2009，11（6）：868-871.
[7] 詹雁，阮佳，谭镭，等.UPLC同时测定决明子中橙黄决明素、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚的含量[J].中国测试，2013，39（2）：56-58.
[8] 晏亮，龚千峰，陈伟康.高效液相色谱法测定参芪十一味颗粒中橙黄决明素和大黄酚的含量[J].海峡药学，2014，26（11）：58-60.
[9] 肖晶，杨杰，高尚伟，等.HPLC法测定保健食品中蒽醌类成分的含量[J].中国食品卫生杂志，2010，22（1）：27-30.
[10] 邹义英，李军生.决明子类保健食品的潜在安全风险分析[J].食品科技，2009，34（5）：295-297.