人TLR1胞外段原核表达载体的构建、蛋白表达及纯化

来源 :中国免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:songxinda
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目的:克隆、原核表达人Toll-like receptor1(TLR1)胞外段基因,获得人TLR1胞外段蛋白。方法:RT-PCR扩增人TLR1胞外段基因,构建pET30(a)+/TLR1表达质粒,转染大肠杆菌BL21,在BL21细胞中表达TLR1胞外段蛋白,并进行纯化和Western blot鉴定。结果:PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pET30(a)+/TLR1胞外段原核表达质粒,PCR扩增的目的基因大小为1700bp左右。表达的包涵体蛋白经溶解及变性后上镍亲和柱纯化,SDS-PAGE分析纯
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