论文部分内容阅读
[摘要]目的探讨神经生长因子（NGF）对2型糖尿病患者胰岛p细胞功能的影响。方法选取我院诊治的2型糖尿病患者66例，随机分为观察组和对照组，每组各33例，两组均给予二甲双胍联合格列齐特缓释片控制血糖，观察组加用神经生长因子肌注治疗，为期2周。2周后，观察两组降糖疗效及胰岛B细胞功能指标，检测指标包括血糖、胰岛素、c-肽、胰岛素功能指数（HOMA-B）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、糖化血红蛋白（HbAlC%）及果糖胺（FMN）。结果观察组胰岛素、c-肽、HOMA-β较对照组有明显升高，两组比较差异有统计学意义（P<0.05），观察组FMN与HOMA-IR较对照组有明显下降，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论神经生长因子具有保护2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的作用。
[关键词]神经生长因子；2型糖尿病；胰岛B细胞
[中图分类号]R587.1
[文献标识码]A
[文章编号]2095-0616（2017）03-83-05
2型糖尿病作为常见的慢性病，高发于中老年人，随着生活方式及生活节奏改变，发病率不断增高，呈年轻化趋势。近年来，国外研究发现：神经生长因子（nerve growth factor，NGF）可促进胰岛B细胞的生长、增殖及代谢，也可增加胰岛素合成，并能通过增加细胞对葡萄糖的敏感性来促进胰岛素分泌。目前对外源性NGF是否具有保护2型糖尿病患者胰岛B细胞，减少其损伤，延缓糖尿病的发生发展的作用尚不明确。本研究拟应用鼠NGF治疗2型糖尿病患者，通过检测胰岛B细胞功能相关指数来评价NGF对胰岛B细胞的影响，以明确鼠NGF对2型糖尿病患者的胰岛B细胞是否具有保护作用。
1.资料与方法
1.1一般资料
选取广州市增城区人民医院2014年7月～2016年6月诊治的近半年未使用胰岛素治疗的2型糖尿病患者共66例，随机分为对照组与观察组。对照组33例，男19例，女14例；年龄35～70岁，平均（44.8±5_2）岁；病程25—75年，平均病程（4.3±13）年；體重指数（BMI）20～34kg/m2，平均体重指数（27.23±2.14）kg/m2，空腹血糖10.2～18.1mmol/L，糖化血红蛋白（HbAlC%）9.1%～12.3%，平均（9.78±2.21）%、果糖胺（FMN）3.2～4.5mmol/L，平均（3.42±0.41）mmol/L；观察组33例，男17例，女16例；年龄33～71岁，平均（43.9±4.9）岁；病程2_3～7.2年，平均（4.4±1.1）年；体重指数（BMI）21～33kg/m2，平均（26.86±1.98）kg/m2，糖化血红蛋白（HbAlC%）9.3%～12.5%，平均（9.73±2.56）%、果糖胺（FMN）3.0～4.7mmol/L，平均（3.48±0.32）mmol/L。两组患者性别、年龄、病程、BMI、空腹血糖、HbAlC%、FMN等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2病例选取标准
1.2.1纳入标准纳入患者均符合中国2型糖尿病防治指南（2013年版）糖尿病诊断标准。
1.2.2排除标准感染、妊娠、外伤等应激情况；合并糖尿病严重急、慢性并发症；对本研究所用药物过敏者；存在严重的其他内分泌系统疾病，如甲状腺功能减退，甲状腺功能亢进、皮质醇增多症等。
1.3研究方法
1.3.1对照组对照组给予双胍类药物及磺脲类药物治疗，口服二甲双胍片（格华止）（中美上海施贵宝，H20023370，0.5g），0.5g，次，3次/d，格列齐特缓释片（达美康）[施维雅（天津）制药有限公司，H20044694，60mg]，60mg/次，1次，d，连续服用2周。
1.3.2观察组观察组患者在对照组基础上接受鼠NGF（恩经复）（厦门北大之路生物工程有限公司，$20060052，18ug/支）治疗，肌注18ug/次，1次，d，连续肌注2周。两组患者在治疗期间均按时、按量服药及肌注，均进行饮食控制、适量运动等基础治疗。
1.4临床疗效评定标准
1.4.1检测指标两组患者治疗前后均行标准馒头餐试验，分别检测患者治疗前后的血浆血糖、胰岛素、C-肽水平、HbAlC及FMN水平，计算HOMA-B及HOMA-IR值。
1.4.2检测仪器及试剂应用美国BECKMANCoulter Au5800全自动生化分析系统测定血糖（葡萄糖氧化酶法，Beckman Coulter试剂）；胰岛素、c肽采用德国Roche Cobas e601系统及Roche公司放射免疫试剂盒测定；HbAlC采用美国伯乐公司（Bio-RAD）离子交换高压液相糖化血红蛋白分析系统Bio-RAD VARANT及Bio-RAD公司配备的试剂盒行测定；果糖胺采用德国Roche Cobase601系统及Roche公司酮胺还原硝基四氮唑蓝比色试剂测定）。
1.4.3胰岛素敏感性测定采用稳态模式评估法：HOMA-β=20×Fins/（FPG-3.5）；HOMA-IR=Fins×FPG/22.5。
1.5统计学方法
采用SPSS19.0进行分析。计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以百分比表示，采用x2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1两组治疗前后血浆血糖水平的比较
观察组与对照组血糖经治疗后在0.5、1、2、3h显著下降，分别与本组治疗前血糖比较差异有统计学意义（P<0.05）；但治疗前后两组组间独立检验血糖变化不明显，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。 2.2两组治疗前后血浆胰岛素水平变化比较
两组胰岛素分泌经治疗后在0.5、1、2h明显增加，分别与本组治疗前比较差异有统计学意义（P<0.05）；观察组经治疗后，在0.5、1h胰岛素分泌较对照组明显增加，差异有统计学意义（P<0.05），胰岛素分泌峰值由治疗前在2小时最高值提前至1小时出现，峰值延后现象有所改善。见表2。
2.3
两组患者治疗前后血浆C-肽水平变化比较
两组C-肽分泌经治疗后在0.5、1、2h明显增加，分别与本组治疗前比较差异有统计学意义（P<0.05）；观察组经治疗后，在0.5、lhC-肽分泌较对照组明显增加，差异有统计学意义（P<0.05），c一肽分泌峰值由治疗前在2小时最高值提前至1小时出现，峰值延后现象有所改善。见表3。
2.4两组治疗前后HOMA-B、HOMA-IK变化比较
对照组HOMA-B及HOMA-IR经治疗后分别与本组治疗前HOMA-B及HOMA-IR比较差异无统计学意义（P>0.05），观察组HOMA-B及HOMA-IR治疗后分别与本组治疗前HOMA-B及HOMA-IR比较差异有统计学意义（P<0.05）；两组治疗后，观察组HOMA-B值较对照组明显增加，HOMA-IR值较对照组明显下降，两组组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。
2.5两组治疗前后糖化血红蛋白（HbAIC）与果糖胺（FMN）变化比较
观察组与对照组经治疗后分别与本组治疗前比较发现两组HbAlC经治疗后均有所下降，但差异无统计学意义（P>0.05）；观察组HbAlc经治疗后较对照组，两组组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。观察组与对照组经治疗后分别与本组治疗前比较发现，两组FMN经治疗后均有所下降，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组FMN经治疗后较对照组显著下降，两组组间比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表5。
3.讨论
2型糖尿病患者随着病情的进展、病程的延长，其胰岛β细胞功能呈进行性下降的趋势。如何保护2型糖尿病患者的胰岛B细胞功能，从而延缓糖尿病的进展，减少并发症的发生显得尤为重要。研究发现鼠NGF具有对大鼠胰岛细胞活力和胰岛素分泌功能损伤的修复作用，鼠NGF与人NGF同源性达90%，但临床中是否对2型糖尿病患者胰岛B细胞功能具有保护修复作用仍需进一步研究。我们利用口服降糖药物组（对照组）与口服降糖药联合鼠NGF组（观察组）的2型糖尿病患者，通过检测血浆血糖、胰岛素、C-肽水平、HbAlC及FMN水平，计算HOMA-B及HOMA-IR值，发现对照组及观察组治疗前后组内配对比较的胰岛素、C-肽水平、HOMA-B均有显著性升高。治疗前后的两组间独立比较发现，对照组的胰岛素及C肽分泌高峰在2小时出现，而观察组的峰值则提前在1小时出现，在2、3小时呈现下降趋势，但观察组0.5、1小时胰岛素及C肽分泌的水平比对照组有显著增高，差異有统计学意义，而2小时及3小时分泌水平比较，差异无统计学意义。2型糖尿病患者由于胰岛B细胞衰竭，从而导致胰岛素、C-肽分泌高峰延迟，而我们利用外源性NGF治疗的观察组，发现该组胰岛素、C-肽分泌高峰可提前出现，提示外源性NGF具有保护胰岛B细胞，促进胰岛素、C-肽分泌的作用。另外通过比较HOMA-B值与HOMA-IR值，我们发现治疗后的观察组HOMA-B较对照组有显著增加，而HOMA-IR则有显著下降，提示治疗组患者的胰岛B细胞功能及胰岛素抵抗程度有所改善。在血糖方面我们发现两组治疗前后配对比较血糖水平均能明显下降，两组治疗后组间独立比较差异无统计学意义；HbAlC在观察组与对照组比较，无论在治疗前后的两组配对比较或是治疗后的两组间独立比较均无显著下降；但我们结合观察组治疗后的组间独立比较FMN水平较对照组有显著下降，提示观察组的降糖效果更理想，考虑可能是因为HbAlC反映的是3个月血糖变化的指标，FMN则是反应1-3周血糖变化的重要指标，由于本研究仅2周时间，可能是导致HbAlC下降不明显的原因。我们的研究结果提示应用外源性NGF联合口服降糖药物治疗2型糖尿病患者，可使患者胰岛素、C肽释放显著增多，FMN下降更显著。
目前已知胰岛B细胞在多种肽类物质的作用下，具有更好的发育及功能表达能力。NGF属于肽类物质，是目前研究比较透彻的一种神经细胞生长调节因子，对神经细胞具有营养作用，能促进其分化、成熟、功能表达及细胞修复的作用。胰岛B细胞具有合成NGF的功能，NGF通过自分泌或者旁分泌作用调节胰岛B细胞生长、分化及合成分泌胰岛素的作用。在胰岛β细胞膜上存在跨膜的NGF受体和信号通路，而对胰岛B细胞增殖或凋亡及胰岛素合成分泌起主要作用的有酪氨酸激酶受体TrkA（该受体是成熟NGF的高亲和力受体）以及肿瘤坏死因子受体p75ntr（该受体是成熟NGF的低亲和力受体）。利用血糖调节体外培育的胰岛B细胞研究发现，当血糖较低时，TrkA信号通路表达，胰岛β细胞呈现生长、增殖、成熟态势，胰岛素合成分泌量明显增加；而当高血糖状态时，则以p75NTa表达为主，TrkA信号通路表达则被抑制，胰岛B细胞呈现凋亡趋势。NGF本身的减少可导致胰岛β细胞的凋亡。我们推测，在血糖控制良好的情况下外源性NGF能使2型糖尿病患者胰岛β细胞功能有所恢复的作用机制可能与体内NGF浓度升高，激活胰岛B细胞TrkA信号通路，从而促使胰岛β细胞生长、增殖、成熟及胰岛素合成分泌量的增加有关。此外，口服降糖药的使用，解除了高血糖对胰岛β细胞的毒性作用，从而抑制了p75NTR信号通路的表达，减少了β细胞凋亡。综上所述，我们认为2型糖尿病患者在使用降糖药物控制好血糖的基础上，应用外源性NGF能够保护患者胰岛β细胞的功能，使血糖更易达标。
[关键词]神经生长因子；2型糖尿病；胰岛B细胞
[中图分类号]R587.1
[文献标识码]A
[文章编号]2095-0616（2017）03-83-05
2型糖尿病作为常见的慢性病，高发于中老年人，随着生活方式及生活节奏改变，发病率不断增高，呈年轻化趋势。近年来，国外研究发现：神经生长因子（nerve growth factor，NGF）可促进胰岛B细胞的生长、增殖及代谢，也可增加胰岛素合成，并能通过增加细胞对葡萄糖的敏感性来促进胰岛素分泌。目前对外源性NGF是否具有保护2型糖尿病患者胰岛B细胞，减少其损伤，延缓糖尿病的发生发展的作用尚不明确。本研究拟应用鼠NGF治疗2型糖尿病患者，通过检测胰岛B细胞功能相关指数来评价NGF对胰岛B细胞的影响，以明确鼠NGF对2型糖尿病患者的胰岛B细胞是否具有保护作用。
1.资料与方法
1.1一般资料
选取广州市增城区人民医院2014年7月～2016年6月诊治的近半年未使用胰岛素治疗的2型糖尿病患者共66例，随机分为对照组与观察组。对照组33例，男19例，女14例；年龄35～70岁，平均（44.8±5_2）岁；病程25—75年，平均病程（4.3±13）年；體重指数（BMI）20～34kg/m2，平均体重指数（27.23±2.14）kg/m2，空腹血糖10.2～18.1mmol/L，糖化血红蛋白（HbAlC%）9.1%～12.3%，平均（9.78±2.21）%、果糖胺（FMN）3.2～4.5mmol/L，平均（3.42±0.41）mmol/L；观察组33例，男17例，女16例；年龄33～71岁，平均（43.9±4.9）岁；病程2_3～7.2年，平均（4.4±1.1）年；体重指数（BMI）21～33kg/m2，平均（26.86±1.98）kg/m2，糖化血红蛋白（HbAlC%）9.3%～12.5%，平均（9.73±2.56）%、果糖胺（FMN）3.0～4.7mmol/L，平均（3.48±0.32）mmol/L。两组患者性别、年龄、病程、BMI、空腹血糖、HbAlC%、FMN等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2病例选取标准
1.2.1纳入标准纳入患者均符合中国2型糖尿病防治指南（2013年版）糖尿病诊断标准。
1.2.2排除标准感染、妊娠、外伤等应激情况；合并糖尿病严重急、慢性并发症；对本研究所用药物过敏者；存在严重的其他内分泌系统疾病，如甲状腺功能减退，甲状腺功能亢进、皮质醇增多症等。
1.3研究方法
1.3.1对照组对照组给予双胍类药物及磺脲类药物治疗，口服二甲双胍片（格华止）（中美上海施贵宝，H20023370，0.5g），0.5g，次，3次/d，格列齐特缓释片（达美康）[施维雅（天津）制药有限公司，H20044694，60mg]，60mg/次，1次，d，连续服用2周。
1.3.2观察组观察组患者在对照组基础上接受鼠NGF（恩经复）（厦门北大之路生物工程有限公司，$20060052，18ug/支）治疗，肌注18ug/次，1次，d，连续肌注2周。两组患者在治疗期间均按时、按量服药及肌注，均进行饮食控制、适量运动等基础治疗。
1.4临床疗效评定标准
1.4.1检测指标两组患者治疗前后均行标准馒头餐试验，分别检测患者治疗前后的血浆血糖、胰岛素、C-肽水平、HbAlC及FMN水平，计算HOMA-B及HOMA-IR值。
1.4.2检测仪器及试剂应用美国BECKMANCoulter Au5800全自动生化分析系统测定血糖（葡萄糖氧化酶法，Beckman Coulter试剂）；胰岛素、c肽采用德国Roche Cobas e601系统及Roche公司放射免疫试剂盒测定；HbAlC采用美国伯乐公司（Bio-RAD）离子交换高压液相糖化血红蛋白分析系统Bio-RAD VARANT及Bio-RAD公司配备的试剂盒行测定；果糖胺采用德国Roche Cobase601系统及Roche公司酮胺还原硝基四氮唑蓝比色试剂测定）。
1.4.3胰岛素敏感性测定采用稳态模式评估法：HOMA-β=20×Fins/（FPG-3.5）；HOMA-IR=Fins×FPG/22.5。
1.5统计学方法
采用SPSS19.0进行分析。计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以百分比表示，采用x2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1两组治疗前后血浆血糖水平的比较
观察组与对照组血糖经治疗后在0.5、1、2、3h显著下降，分别与本组治疗前血糖比较差异有统计学意义（P<0.05）；但治疗前后两组组间独立检验血糖变化不明显，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。 2.2两组治疗前后血浆胰岛素水平变化比较
两组胰岛素分泌经治疗后在0.5、1、2h明显增加，分别与本组治疗前比较差异有统计学意义（P<0.05）；观察组经治疗后，在0.5、1h胰岛素分泌较对照组明显增加，差异有统计学意义（P<0.05），胰岛素分泌峰值由治疗前在2小时最高值提前至1小时出现，峰值延后现象有所改善。见表2。
2.3
两组患者治疗前后血浆C-肽水平变化比较
两组C-肽分泌经治疗后在0.5、1、2h明显增加，分别与本组治疗前比较差异有统计学意义（P<0.05）；观察组经治疗后，在0.5、lhC-肽分泌较对照组明显增加，差异有统计学意义（P<0.05），c一肽分泌峰值由治疗前在2小时最高值提前至1小时出现，峰值延后现象有所改善。见表3。
2.4两组治疗前后HOMA-B、HOMA-IK变化比较
对照组HOMA-B及HOMA-IR经治疗后分别与本组治疗前HOMA-B及HOMA-IR比较差异无统计学意义（P>0.05），观察组HOMA-B及HOMA-IR治疗后分别与本组治疗前HOMA-B及HOMA-IR比较差异有统计学意义（P<0.05）；两组治疗后，观察组HOMA-B值较对照组明显增加，HOMA-IR值较对照组明显下降，两组组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。
2.5两组治疗前后糖化血红蛋白（HbAIC）与果糖胺（FMN）变化比较
观察组与对照组经治疗后分别与本组治疗前比较发现两组HbAlC经治疗后均有所下降，但差异无统计学意义（P>0.05）；观察组HbAlc经治疗后较对照组，两组组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。观察组与对照组经治疗后分别与本组治疗前比较发现，两组FMN经治疗后均有所下降，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组FMN经治疗后较对照组显著下降，两组组间比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表5。
3.讨论
2型糖尿病患者随着病情的进展、病程的延长，其胰岛β细胞功能呈进行性下降的趋势。如何保护2型糖尿病患者的胰岛B细胞功能，从而延缓糖尿病的进展，减少并发症的发生显得尤为重要。研究发现鼠NGF具有对大鼠胰岛细胞活力和胰岛素分泌功能损伤的修复作用，鼠NGF与人NGF同源性达90%，但临床中是否对2型糖尿病患者胰岛B细胞功能具有保护修复作用仍需进一步研究。我们利用口服降糖药物组（对照组）与口服降糖药联合鼠NGF组（观察组）的2型糖尿病患者，通过检测血浆血糖、胰岛素、C-肽水平、HbAlC及FMN水平，计算HOMA-B及HOMA-IR值，发现对照组及观察组治疗前后组内配对比较的胰岛素、C-肽水平、HOMA-B均有显著性升高。治疗前后的两组间独立比较发现，对照组的胰岛素及C肽分泌高峰在2小时出现，而观察组的峰值则提前在1小时出现，在2、3小时呈现下降趋势，但观察组0.5、1小时胰岛素及C肽分泌的水平比对照组有显著增高，差異有统计学意义，而2小时及3小时分泌水平比较，差异无统计学意义。2型糖尿病患者由于胰岛B细胞衰竭，从而导致胰岛素、C-肽分泌高峰延迟，而我们利用外源性NGF治疗的观察组，发现该组胰岛素、C-肽分泌高峰可提前出现，提示外源性NGF具有保护胰岛B细胞，促进胰岛素、C-肽分泌的作用。另外通过比较HOMA-B值与HOMA-IR值，我们发现治疗后的观察组HOMA-B较对照组有显著增加，而HOMA-IR则有显著下降，提示治疗组患者的胰岛B细胞功能及胰岛素抵抗程度有所改善。在血糖方面我们发现两组治疗前后配对比较血糖水平均能明显下降，两组治疗后组间独立比较差异无统计学意义；HbAlC在观察组与对照组比较，无论在治疗前后的两组配对比较或是治疗后的两组间独立比较均无显著下降；但我们结合观察组治疗后的组间独立比较FMN水平较对照组有显著下降，提示观察组的降糖效果更理想，考虑可能是因为HbAlC反映的是3个月血糖变化的指标，FMN则是反应1-3周血糖变化的重要指标，由于本研究仅2周时间，可能是导致HbAlC下降不明显的原因。我们的研究结果提示应用外源性NGF联合口服降糖药物治疗2型糖尿病患者，可使患者胰岛素、C肽释放显著增多，FMN下降更显著。
目前已知胰岛B细胞在多种肽类物质的作用下，具有更好的发育及功能表达能力。NGF属于肽类物质，是目前研究比较透彻的一种神经细胞生长调节因子，对神经细胞具有营养作用，能促进其分化、成熟、功能表达及细胞修复的作用。胰岛B细胞具有合成NGF的功能，NGF通过自分泌或者旁分泌作用调节胰岛B细胞生长、分化及合成分泌胰岛素的作用。在胰岛β细胞膜上存在跨膜的NGF受体和信号通路，而对胰岛B细胞增殖或凋亡及胰岛素合成分泌起主要作用的有酪氨酸激酶受体TrkA（该受体是成熟NGF的高亲和力受体）以及肿瘤坏死因子受体p75ntr（该受体是成熟NGF的低亲和力受体）。利用血糖调节体外培育的胰岛B细胞研究发现，当血糖较低时，TrkA信号通路表达，胰岛β细胞呈现生长、增殖、成熟态势，胰岛素合成分泌量明显增加；而当高血糖状态时，则以p75NTa表达为主，TrkA信号通路表达则被抑制，胰岛B细胞呈现凋亡趋势。NGF本身的减少可导致胰岛β细胞的凋亡。我们推测，在血糖控制良好的情况下外源性NGF能使2型糖尿病患者胰岛β细胞功能有所恢复的作用机制可能与体内NGF浓度升高，激活胰岛B细胞TrkA信号通路，从而促使胰岛β细胞生长、增殖、成熟及胰岛素合成分泌量的增加有关。此外，口服降糖药的使用，解除了高血糖对胰岛β细胞的毒性作用，从而抑制了p75NTR信号通路的表达，减少了β细胞凋亡。综上所述，我们认为2型糖尿病患者在使用降糖药物控制好血糖的基础上，应用外源性NGF能够保护患者胰岛β细胞的功能，使血糖更易达标。