【摘 要】
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目的:克隆藏羚羊α-珠蛋白基因编码区, 并进行同源性分析.方法:从藏羚羊肝组织中提取总RNA, 通过RT-PCR获得藏羚羊α-珠蛋白cDNA, 将其与pGEM-T Easy载体连接, 构成重组质粒,
【机 构】
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青海大学医学院高原医学研究中心,青海,西宁,810001
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目的:克隆藏羚羊α-珠蛋白基因编码区, 并进行同源性分析.方法:从藏羚羊肝组织中提取总RNA, 通过RT-PCR获得藏羚羊α-珠蛋白cDNA, 将其与pGEM-T Easy载体连接, 构成重组质粒, 并转化大肠杆菌TOP10扩增培养后, 鉴定阳性质粒并进行测序.将测序的结果与NCBI 数据库进行同源性比较.结果:获得α- 珠蛋白编码区cDNA序列, 提交GenBank数据库并取得注册号为DQ650713.与绵羊α-珠蛋白基因相比较, 其在16、53、132、134处出现核苷酸密码子突变(GAC→GGC)、(TCG→TCC)、(AGC→GGC)、(AAC→GC).推导的氨基酸序列比较发现,132位的天冬酰胺酸(Asn)突变为丝氨酸(Ser), 134位的丝氨酸(Ser)突变为甘氨酸(Gly);与人类的α-珠蛋白相比较, 有19处的氨基酸发生改变.结论:成功地克隆出藏羚羊α-珠蛋白基因编码区, 为高原低氧适应相关基因的研究提供了实验依据.
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