【摘 要】
:
目的 构建针对高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)基因的特异性RNA干扰载体,建立稳定转染该干扰载体的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC).方法 根据HMGB1基因的编码序列及短发夹RNA(shRNA)设
【机 构】
:
中国医科大学附属第一医院重症医学科
论文部分内容阅读
目的 构建针对高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)基因的特异性RNA干扰载体,建立稳定转染该干扰载体的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC).方法 根据HMGB1基因的编码序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则,设计并合成针对HMGB1基因的特异性shRNA,将其定向克隆到pRNA-u6.1/Neo载体中,同时设立阴性对照,重组载体经脂质体转染HUVEC;转染细胞经类氨基糖抗生素样物质G418筛选,采用实时荧光逆转录-聚合酶链反应检测HMGB1mRNA表达,蛋白质免疫印迹法检测HMGB1蛋白表达.结果 酶切鉴定和测序证实,重组质粒shRNA序列与设计的片段完全一致.HMGB1基因特异性RNA干扰载体能够显著抑制HMGB1在HUVEC细胞中的表达(mRNA:0.4635±0.0342比1.0340±0.0352,蛋白:0.4510 ± 0.0200比1.0210±0.0110,均P<0.05).结论 成功构建了靶向HMGB1基因的shRNA真核表达载体pRNA-HMGB1,并获得了稳定表达靶向HMGB1基因的shRNA的HUVEC细胞株,为进一步研究HMGB1在HUVEC细胞株中的生物学功能和作用机制奠定了基础.
其他文献
适合的人才是最好的人才,面对大学生就业压力的凸显及行业竞争压力的提高,选对合适的人及培养合适的人,是企业及学校共同面临的课题.本文在调查研究的基础上,分析比较了旅行
2008年、2009年连续在绥阳县开展脱毒马铃薯配方施肥的实际应用效果同田对比探究,结果表明,配方施肥比习惯施肥平均增产9.41%,差异达显著水平,平均增收71.00元/667m2;可应用
目的采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选双侧肾母细胞瘤(BWT)的差异性表达蛋白。方法选取BWT患儿血清标本10例(BWT组),另选单侧肾母细胞瘤(UWT)患
2008年由美国开始的金融和经济危机,表明了资本主义新自由主义模式的体制危机开始出现.新自由主义模式在过去几十年里刺激了高利润和促进了较长时期的经济增长.然而在发展过
为了获得性能优良的新型β-甘露聚糖酶,本研究采用基因挖掘技术从米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40基因组中挖掘到了2个假定的新型GH5家族β-甘露聚糖酶基因,分别命名为Aoman
本试验旨在研究苜蓿皂苷对山羊瘤胃细菌发酵功能的影响.选择4只22月龄、体况良好、安装永久性瘤胃瘘管的徐淮山羊,晨饲后3h采集瘤胃液,分离出细菌后,采用批次培养法进行体外
我国新源于法理和我国立法抽象,使我国理论界和实务界对其理解不一,在司法实践中出现了对该制度的滥用和误用.为完善该诉讼的良好运行,只要具体的公共利益受到损害,代表公共
在汶川大地震后的产业重建过程中,四川面临重污染产业重建、资源依赖型产业重建、东部转移产业承接、地震带工业布局调整等若干重大问题。随着灾后重建时间的压缩,这些问题将
NGO和政府都在致力于秦巴山区的扶贫开发工作,本文通过建立NGO和政府在资源约束下扶贫开发的投入模型,运用博弈均衡分析探计他们合作的原因和机制,并通过大巴山区草根NGO的项
利用林间生测技术,比较了自主合成的与国外引进的重齿小蠹聚集信息素的诱捕效果,并应用自主合成的信息素进行了发生期监测和大量诱杀防治的试验。结果表明:国内与国外信息素