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根据GenBank中包拉米虫和派琴虫保守基因序列，用PrimerExpress3．0软件设计合成了两对引物和两条TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化，建立了能够同时检测包拉米虫和派琴虫的二重荧光定量PCR方法。该方法对包拉米虫和派琴虫的检测敏感性达到200个模板拷贝数；此外抗干扰能力强，对包拉米虫和派琴虫不同模板浓度进行组合，仍可有效同时检测到这两个原虫。该方法对单孢子虫、马尔太虫、副溶血弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等病原体的检测，结果全为阴性。研究建立的包拉米虫和派琴虫荧光定量PCR具有特异、敏感、