单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

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目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原(CAg)的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体(单抗3F1和4H2)夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1(3F1、4H2),1株为IgM(2A2),杂交瘤细胞培养上清效价分别为1∶25600、1∶25600和1∶12800,诱生腹水ELISA效价分别为1∶80000、1∶80000和1∶40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84.2%(48/57)和87.2%(41/47),广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86.4%(19/22),与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A450值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3F1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。
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