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摘要：
目的：建立新生化颗粒中盐酸益母草碱含量测定的方法。方法：色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈-0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液（26：74）为流动相；流速1.0mL/min；检测波长277nm；柱温25℃。结果：盐酸益母草碱在5.4～86.4μg/ml范围内呈良好的线性关系（r=0.9995），加样回收率为98.80%，RSD为0.72（n=6）；结论：本方法简便、准确、重复性好，可用于新生化颗粒的质量控制。
关键词：高效液相色谱法；新生化颗粒；益母草碱
【中图分类号】
R453 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0046-02
新生化颗粒由当归、川芎、桃仁、益母草等组成，具有活血、去淤、止痛的功效。处方中益母草其主要有效成分为丁香酸、益母草碱等。益母草碱具有活血化淤、利水消肿的作用。笔者采用高效液相色谱法测定该成分的含量[1-4]。该方法简单、准确、重复性好，可用于新生化颗粒的质量控制。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪；Sartorius-ME235S电子天平；盐酸益母草碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号111823-201202，含量94.7%）；新生化颗粒（云南白药集团股份有限公司，批号分别为ZLB1301，ZLB1302，ZLB1304）。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液（26：74）；流速1.0mL/min；检测波长277nm；柱温25℃。进样量：10μL。
2.2 溶液制备：
取盐酸益母草碱对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含30μg的溶液，即得对照品溶液。 取本品，研细，精密称取约4.0g，置锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用 70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得供试品溶液。按新生化颗粒剂制备工艺，制备缺益母草的阴性样品，照供品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
2.3 方法学考察：
系统适用性试验取22项下3种溶液，拟定的色谱条件进行测定。结果阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱峰相应保留时间位置上未出现吸收峰，说明处方中其他成分对测定无干扰。见图1。
图1高效液相色谱图（1）阴性对照品溶液（2）对照品溶液（3）供试品溶液
线性关系考察：精密称取盐酸益母草碱对照品（含量94.7%计）10.8mg，70%乙醇溶液定容于100mL容量瓶中，得质量浓度约为108μg/ml作为母液，分别精密吸取母液0.5；1.0；2.0；4.0；8.0ml；分别定容于10ml的容量瓶中，得质量浓度分别为5.4；10.8；21.6；43.2；86.4μg/ml盐酸益母草对照品溶液，分别取上述溶液10μl注入液相色谱仪，以质量浓度为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），线性回归得回归方程为：y=17x+20.23，r=0.9995，表明盐酸益母草碱质量浓度在5.4～86.4μg/ml范围内线性关系良好。
精密度试验：取21制备的对照品溶液，按23色谱条件重复进样6次，结果峰面积的RSD为0.71%（n=6），表明仪器精密度良好。
重复性试验：精密称取同一批号样品（批号为ZLB1304），按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果峰面积的RSD为0.97%（n=6），表明方法重现性好。
稳定性试验：取同一供试品溶液，于制备后0，2，4，8，12，24h进样。结果峰面积的RSD为1.17%、（n=6），表明供试品溶液在24h内稳定。
加样回收试验：取已知含量的样品（批号ZLB1304）6份，精密加入盐酸益母草碱对照品（浓度为0.108mg/ml）适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定，计算回收率，结果盐酸益母草碱平均回收率为98.80%，RSD%为0.72%；结果见表1。
表1 盐酸益母草碱加样回收实验结果（n=6）
3 讨论
照《中国药典》2010年版一部“益母草”项下的含量测定方法，故选择用70%乙醇加热回流提取，为保证被测成分的完全提取，实验中考察了回流1、2、3小时不同提取时间对提取效率的影响，结果表明回流2小时后供试品中盐酸益母草碱的含量基本稳定不变，故将提取时间定为加热回流2小时。曾试用水、70%甲醇、70%乙醇提取，结果发现，用70%乙醇作为提取溶剂效果最优。
本实验采用的处理方法简便易行，结果准确可靠，专属性强，重现性好，可用于该制剂的质量控制。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].中国医药科技出版，2010.141-142.
[2]瞿京红，刘菁，吴进，高效液相色谱法测定益母草软胶囊中益母草碱的含量，[J]中国医药导报，2011，13（9）：1631-1632.
[3]陈喆，宋康，李晓娟，等.HPLC测定益母草颗粒和益母草膏中益母草碱含量，[J]中国中药杂志，2009，34（12）：1509-1511.
[4]江帆，聂晶，余建清，等.高效液相法测定益母草中益母草碱含量研究，[J]分析科学学报，2008，24（3）：347-349.
目的：建立新生化颗粒中盐酸益母草碱含量测定的方法。方法：色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈-0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液（26：74）为流动相；流速1.0mL/min；检测波长277nm；柱温25℃。结果：盐酸益母草碱在5.4～86.4μg/ml范围内呈良好的线性关系（r=0.9995），加样回收率为98.80%，RSD为0.72（n=6）；结论：本方法简便、准确、重复性好，可用于新生化颗粒的质量控制。
关键词：高效液相色谱法；新生化颗粒；益母草碱
【中图分类号】
R453 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0046-02
新生化颗粒由当归、川芎、桃仁、益母草等组成，具有活血、去淤、止痛的功效。处方中益母草其主要有效成分为丁香酸、益母草碱等。益母草碱具有活血化淤、利水消肿的作用。笔者采用高效液相色谱法测定该成分的含量[1-4]。该方法简单、准确、重复性好，可用于新生化颗粒的质量控制。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪；Sartorius-ME235S电子天平；盐酸益母草碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号111823-201202，含量94.7%）；新生化颗粒（云南白药集团股份有限公司，批号分别为ZLB1301，ZLB1302，ZLB1304）。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液（26：74）；流速1.0mL/min；检测波长277nm；柱温25℃。进样量：10μL。
2.2 溶液制备：
取盐酸益母草碱对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含30μg的溶液，即得对照品溶液。 取本品，研细，精密称取约4.0g，置锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用 70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得供试品溶液。按新生化颗粒剂制备工艺，制备缺益母草的阴性样品，照供品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
2.3 方法学考察：
系统适用性试验取22项下3种溶液，拟定的色谱条件进行测定。结果阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱峰相应保留时间位置上未出现吸收峰，说明处方中其他成分对测定无干扰。见图1。
图1高效液相色谱图（1）阴性对照品溶液（2）对照品溶液（3）供试品溶液
线性关系考察：精密称取盐酸益母草碱对照品（含量94.7%计）10.8mg，70%乙醇溶液定容于100mL容量瓶中，得质量浓度约为108μg/ml作为母液，分别精密吸取母液0.5；1.0；2.0；4.0；8.0ml；分别定容于10ml的容量瓶中，得质量浓度分别为5.4；10.8；21.6；43.2；86.4μg/ml盐酸益母草对照品溶液，分别取上述溶液10μl注入液相色谱仪，以质量浓度为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），线性回归得回归方程为：y=17x+20.23，r=0.9995，表明盐酸益母草碱质量浓度在5.4～86.4μg/ml范围内线性关系良好。
精密度试验：取21制备的对照品溶液，按23色谱条件重复进样6次，结果峰面积的RSD为0.71%（n=6），表明仪器精密度良好。
重复性试验：精密称取同一批号样品（批号为ZLB1304），按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果峰面积的RSD为0.97%（n=6），表明方法重现性好。
稳定性试验：取同一供试品溶液，于制备后0，2，4，8，12，24h进样。结果峰面积的RSD为1.17%、（n=6），表明供试品溶液在24h内稳定。
加样回收试验：取已知含量的样品（批号ZLB1304）6份，精密加入盐酸益母草碱对照品（浓度为0.108mg/ml）适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定，计算回收率，结果盐酸益母草碱平均回收率为98.80%，RSD%为0.72%；结果见表1。
表1 盐酸益母草碱加样回收实验结果（n=6）
3 讨论
照《中国药典》2010年版一部“益母草”项下的含量测定方法，故选择用70%乙醇加热回流提取，为保证被测成分的完全提取，实验中考察了回流1、2、3小时不同提取时间对提取效率的影响，结果表明回流2小时后供试品中盐酸益母草碱的含量基本稳定不变，故将提取时间定为加热回流2小时。曾试用水、70%甲醇、70%乙醇提取，结果发现，用70%乙醇作为提取溶剂效果最优。
本实验采用的处理方法简便易行，结果准确可靠，专属性强，重现性好，可用于该制剂的质量控制。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].中国医药科技出版，2010.141-142.
[2]瞿京红，刘菁，吴进，高效液相色谱法测定益母草软胶囊中益母草碱的含量，[J]中国医药导报，2011，13（9）：1631-1632.
[3]陈喆，宋康，李晓娟，等.HPLC测定益母草颗粒和益母草膏中益母草碱含量，[J]中国中药杂志，2009，34（12）：1509-1511.
[4]江帆，聂晶，余建清，等.高效液相法测定益母草中益母草碱含量研究，[J]分析科学学报，2008，24（3）：347-349.