【摘 要】
：
该文旨在比较不同的转染试剂介导两种荧光素酶报告基因转染人胚肾细胞293T的效果.采用月旨质体转染试剂Lipofectamine(R) 2000、非脂质体成分X-tremeGENE HP DNA和FuGENE(R)HID转染试剂,选取不同配比的质粒DNA和转染试剂分别将含有绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)的质粒转入293T细胞中,应用倒置荧光显微镜和流式细胞仪分析转染效率,锥虫蓝染色法检测细胞存活率.X-tremeGENE HP DNA转染试剂转染293T细胞的效率最高,不管目的 基因、质粒D
【机 构】
：
中山大学附属第七医院,消化医学中心,深圳518107
论文部分内容阅读
该文旨在比较不同的转染试剂介导两种荧光素酶报告基因转染人胚肾细胞293T的效果.采用月旨质体转染试剂Lipofectamine(R) 2000、非脂质体成分X-tremeGENE HP DNA和FuGENE(R)HID转染试剂,选取不同配比的质粒DNA和转染试剂分别将含有绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)的质粒转入293T细胞中,应用倒置荧光显微镜和流式细胞仪分析转染效率,锥虫蓝染色法检测细胞存活率.X-tremeGENE HP DNA转染试剂转染293T细胞的效率最高,不管目的 基因、质粒DNA和转染试剂的配比如何,其转染效率均显著高于脂质体转染试剂(P均＜0.05);在相同的质粒DNA和转染试剂比例下,FuGENE(R) HD试剂介导GFP转染的效率显著高于脂质体试剂Lipofectamine(R)2000(P均＜0.05),但二者介导RFP转染的效率无显著性差异(P均＞0.05);在质粒DNA和转染试剂比为1∶2时,X-tremeGENE HP DNA试剂转染GFP和RFP的效率均显著高于FuGENE(R) HD试剂(P均＜0.05),当比例递变为1∶4时,二者的转染效率无显著性差异(P均＞0.05).随着转染试剂使用量的增多,Lipo-fectamine(R) 2000和FuGENE(R)HD试剂的转染效率明显升高,而X-tremeGENE HP DNA试剂的转染效率则下降.与转染GFP基因相比,三种试剂的转染效率均随着目的 基因RFP片段的增大而显著降低(P均＜0.05).在质粒DNA和转染试剂的比例相同的情况下,三种试剂转染后的存活率无显著性差异(P均＞0.05),但随着转染试剂用量的增加,三种试剂转染后的细胞存活率均显著降低(P均＜0.05).目的 基因大小与转染效率成反比,综合考虑转染试剂用量、转染效率和细胞活性,该研究认为X-tremeGENE HP DNA转染试剂效果最好.
其他文献
OVOL2在神经管、心脏、胎盘和乳腺等的发育过程中发挥重要作用,近年来研究表明OVOL2参与调控肿瘤的发生发展.OVOL2通过抑制上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因(ZEB1、SLUG、TWIST1等)的表达和WNT、TGF-β信号通路,从而抑制癌细胞的侵袭和转移,其表达水平与癌症患者的总生存率呈正相关.研究发现,中等程度的EMT与癌细胞干性相关,OVOL2除了通过EMT调控癌细胞干性之外,可能还存在其他调控机制.因此,OVOL2是治疗恶性
弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin lymphoma,NHL)中最常见的亚型,其发病机制错综复杂,至今尚未被充分阐明.因其具有较大的异质性导致患者预后差,针对DLBCL的治疗面临着巨大的挑战.近年来,表观遗传修饰成为DLBCL发病机制的研究热点.越来越多的研究表明,m6A-RNA甲基化可动态调节DLBCL的发生发展.该文就m6A-RNA甲基化修饰在DLBCL中的研究进展作一综述,从表观遗传学的角度为DLBCL
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)来源于发育早期中胚层,具有多向分化潜能,已广泛应用于科学研究和临床前试验,且在多种疾病的治疗研究中展现出一定的安全性和有效性,具有广阔的应用前景.由于传统单层细胞培养方式无法长期保持MSCs的生物学特性,因此基于细胞球、中空纤维、生物支架和微载体等的三维培养技术逐渐应用于MSCs的科学研究和临床前试验.该文通过阐述三维培养MSCs的优点和三维培养的MSCs在疾病治疗中的进展,探索三维培养的MSCs在科学研究和临床应用中的前景.
胰岛素增强子结合蛋白-1 (insulin gene enhancer binding protein-1,ISL1)是一种含两个LIM结构域和一个HD(homeodomain)结构域的转录因子,已被证明能调节多种信号通路和生物进程.在正常组织细胞中,ISL1通过与多个转录因子相互作用来精确调控靶基因表达从而促进细胞的分化、增殖等生物学过程.在肿瘤细胞中,ISL1通过影响细胞增殖和转移以及其他细胞过程最终在癌症的发生和发展中发挥作用.该文回顾ISL1参与的调控网络如何影响细胞增殖和肿瘤发生,细胞分化,细胞
BCL3转录共激活因子(BCL3 transcription coactivator)通过与p50或p52同型二聚体结合,发挥调节细胞周期、促进细胞存活和抗细胞凋亡的生物学功能.BCL3基因的异常表达与多种恶性肿瘤的发生、发展相关.研究表明,BCL3在细胞中的定位与功能相关,然而其亚细胞定位和调节机制尚不清楚.该研究旨在探讨BCL3蛋白在HeLa细胞中的亚细胞定位.首先,通过数据库和在线软件预测BCL3的亚细胞定位;然后,构建BCL3的缺失突变体表达质粒,用其转染HeLa细胞,利用Western blot
The ability of mammals to navigate large and ever-changing environments requires sophisticated computations and repre-sentations that are usually thought to depend on the hippocampus and associated structures.In a recent study published in Cell Research,L
骨疾病是指机体因先天或后天性因素破坏正常骨代谢,导致骨代谢障碍而发生的一类疾病.骨主要由负责骨吸收的破骨细胞和负责骨重建的成骨细胞以及骨细胞构成.正常成人的骨形成量基本等于骨吸收量,两者处于动态平衡状态,保证了骨结构和功能的完整性.自噬是一种重要的细胞内清除机制,通过形成自噬溶酶体降解其所包裹的受损细胞器或蛋白质,实现细胞代谢和细胞器的更新.自噬相关基因的缺失能够抑制破骨细胞的骨吸收和成骨细胞的骨重建,而药物、肿瘤坏死因子等能够使自噬相关基因过表达导致骨吸收异常增加,造成骨吸收和骨形成之间的动态平衡失调,
鼓膜穿孔(tympanic membrane perforation,TMP)是耳鼻咽喉科常见的疾病.急性TMP多数能自愈,而慢性TMP现主要使用手术治疗,然而现有手术治疗方法均存在缺陷,例如需要全麻、费用较高、技巧复杂等,故探究更佳的治疗方法显得尤为重要.富血小板浓缩物主要包括富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)和富血小板纤维(platelet-rich fibrin,PRF),其富含生长因子和白细胞,故可有效促进组织再生,并降低感染发生率.以往作为新型修复材料,PRP和PR
该研究通过构建携带线粒体tRNAThr 15943T＞C协同12S rRNA 1555A＞G突变(双突变组)的永生化淋巴母细胞系,同时建立仅含12S rRNA 1555A＞G突变(单突变组)和正常对照组永生化淋巴母细胞系,探究线粒体tRNAThr 15943T＞C协同12S rRNA 1555A＞G突变与耳聋发病的关系,以了解线粒体突变致聋的分子机制.对该家系的临床资料进行分析的结果表明,当包括使用氨基糖苷类抗生素(aminoglycoside antibiotic,AmAn)的药物性耳聋家系成员时,此家
趋化因子配体3 [chemokine (C-C motif) ligand 3,CCL3]是趋化因子家族的一员,广泛表达于神经系统和免疫系统中.研究表明,CCL3可通过募集免疫细胞、激活细胞内的信号通路以及介导神经元与神经胶质细胞间的相互作用,从而参与神经病理性疼痛、炎性痛的发生及维持.此外,CCL3还可引起μ型阿片肽受体(mu opioid receptor,MOR)脱敏,从而影响吗啡等的镇痛作用,并参与阿片耐受的形成过程.该文综述了CCL3及其受体在病理性疼痛和阿片耐受中的作用.