大肠杆菌肠毒素ST_1—LT_B融合基因的高效表达

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用限制性核酸内切酶EcoRI和HindⅢ双酶切含大肠杆菌肠毒素ST1—LTB融合基因的质粒pXSLT1,回收0.84kb的ST1—LTB融合基因,再将载体pET—28b(+)用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,然后将其与ST1—LTB融合基因连接,转化至受体菌BL21(DE3)中。经EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切反应鉴定重组子质粒,得到了理想重组质粒pXET-SLT1。重组菌株BL21(DE3)(pXETSLT1)经IPTG诱导后,其表达产物经SDS—PAGE和ELISA检测,结果表明重组菌株可以高效表达ST1—LTB融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的33.21%,而且无天然ST1生物毒性 The plasmid pXSLT1 containing the E. coli enterotoxin ST1-LTB fusion gene was digested with restriction endonucleases EcoRI and HindIII to recover the 0.84kb ST1-LTB fusion gene, and then the vector pET-28b (+) was digested with EcoRI and EcoRI Hind Ⅲ double digestion, and then with ST1-LTB fusion gene, transformed into the recipient bacteria BL21 (DE3). After digestion with EcoRⅠ, HindⅢand BamHⅠ, the recombinant plasmid was identified and the recombinant plasmid pXET-SLT1 was obtained. The expressed product of recombinant strain BL21 (DE3) (pXETSLT1) induced by IPTG was detected by SDS-PAGE and ELISA. The results showed that the recombinant strain could express ST1-LTB fusion protein efficiently, which accounted for 33.21 %, And no natural ST1 biological toxicity
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