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目的
构建大鼠整合素β1(integrinβ1)基因RNA干扰慢病毒载体,为研究Sombati癫痫细胞模型integrin β1的作用机制提供载体。
方法构建integrin β1基因的4个shRNA慢病毒干扰载体,利用HEK 293T细胞进行慢病毒包装,感染靶细胞PC12,采用Western印迹验证干扰效果,筛选出沉默效果最好的慢病毒shRNA,感染新生大鼠海马神经元细胞和Sombati癫痫细胞,通过Western印迹检测其对海马神经元和Sombati癫痫细胞integrinβ1的基因沉默效果。
结果经测序证实RNAi慢病毒载体构建成功,病毒达到有效滴度,PC12细胞病毒转染率达95%以上;Western印迹证实,重组慢病毒integrin β1 shRNA感染海马神经元细胞和Sombati癫痫细胞后integrinβ1蛋白表达下降,integrin β1 shRNA2重组慢病毒载体对海马神经元和Sombati癫痫细胞的沉默效率分别为70%和90%。
结论成功构建integrin β1 RNA干扰慢病毒载体,并在新生大鼠海马神经元和Sombati癫痫细胞中实现有效的基因沉默效应。