【摘 要】
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目的 研究小分子干扰RNA(small interference RNA,SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)的表达及其与细胞凋亡的关系,探讨Trx-2对高氧肺
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科
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目的 研究小分子干扰RNA(small interference RNA,SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)的表达及其与细胞凋亡的关系,探讨Trx-2对高氧肺损伤线粒体的保护作用. 方法 体外传代培养A549细胞系,将Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipo-fectamine 2000转染A549细胞,随机分为干扰后空气组、无干扰高氧组和干扰后高氧组.三组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h后采用RT-PCR技术测定Trx-2和细胞色素c(cytochrome c,Cytc)mRNA的表达;采用流式细胞术检测三组A549细胞凋亡情况. 结果 (1)RT-PCR检测显示序列特异性SiRNA可显著降低Trx-2 mRNA的表达.(2)干扰后高氧组24 h Trx-2 mRNA水平为0.2774±0.0174,48 h为0.2587±0.0069,均低于无干扰高氧组(分别为0.7799±0.1249,0.4050±0.0842)(P均<0.05).无干扰高氧组24 h Trx-2 mRNA水平高于干扰后空气组(0.4046±0.0161)(P<0.05).(3)无干扰高氧组24 h Cytc mRNA水平为0.3957±0.0903,48 h为0.3438±0.0092,均低于干扰后高氧组(分别为0.6620±0.0395,0.4806±0.0977)和干扰后空气组(分别为0.5197±0.0377,0.4902±0.1079)(P均<0.05).(4)干扰后高氧组A549细胞凋亡率明显高于干扰后空气组. 结论 SiRNA能显著下调A549细胞Trx-2 mRNA的表达;高氧暴露诱导SiRNA干扰后A549细胞Trx-2和Cytc mRNA表达的变化表明Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用.
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