【摘 要】
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目的建立高效表达全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体(TRAIL)-R1单克隆抗体(TR1-404)蛋白体系，并评价TR1-404抗体蛋白功能特性。方法构建pcDNA3.4载体抗体质粒，转染Expi293F™细胞，表达抗体蛋白。收集细胞培养上清，使用ProteinA/G纯化抗体蛋白。利用双抗体夹心和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体蛋白浓度及特异性。流式细胞分析检测TR1-404与H
【机 构】
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150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫学教研室,150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫学教研室,150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫学教研室,150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫学
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目的建立高效表达全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体(TRAIL)-R1单克隆抗体(TR1-404)蛋白体系，并评价TR1-404抗体蛋白功能特性。
方法构建pcDNA3.4载体抗体质粒，转染Expi293F™细胞，表达抗体蛋白。收集细胞培养上清，使用ProteinA/G纯化抗体蛋白。利用双抗体夹心和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体蛋白浓度及特异性。流式细胞分析检测TR1-404与Hela细胞和HCT116细胞表面TRAIL-R1的结合能力。MTT法检测在不同时间点TR1-404、TRAIL及二者联合作用对Hela细胞和HCT116细胞生存和增殖的影响。Annexin Ⅴ/PI双染色检测Hela细胞和HCT116细胞凋亡。
结果成功构建pcDNA3.4载体抗体质粒和建立Expi293F™细胞蛋白高效表达系统。精制的TR1-404抗体既与重组TRAIL-R1抗原特异性结合，也能与Hela和HCT116细胞表面的TRAIL-R1结合。发现TR1-404联合TRAIL作用于Hela细胞，肿瘤细胞凋亡效果显著提高。而在HCT116细胞中，TRAIL与TR1-404的联合作用未见显著提高。
结论成功建立抗体蛋白高效表达系统。TR1-404抗体特异性与TRAIL-R1抗原结合。TR1-404抗体提高TRAIL诱导的Hela细胞凋亡作用。本研究为TRAIL-R1靶向的抗肿瘤治疗研究提供新方法。
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