【摘 要】
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目的利用Gadd45可诱导细胞系探讨Gadd45对肿瘤细胞生长抑制作用的分子机理.方法用四环素撤除表达系统以及克隆形成实验、流式细胞检测、TUNEL法检测、Western 印迹检测等方法
【机 构】
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100021,北京,中国医学科学院,中国协和医科大学肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室
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目的利用Gadd45可诱导细胞系探讨Gadd45对肿瘤细胞生长抑制作用的分子机理.方法用四环素撤除表达系统以及克隆形成实验、流式细胞检测、TUNEL法检测、Western 印迹检测等方法研究Gadd45表达对肿瘤细胞HCT116生长的抑制作用及其机理.结果用四环素撤除表达系统,建立了稳定传代的Gadd45可诱导细胞系HCT116.撤除四环素,HCT116细胞的Gadd45能够被诱导高表达.实验结果证实,在我们建立的细胞系中,Gadd45诱导高表达对细胞生长的抑制率高于85%. 流式细胞检测表明, Gadd45高表达有细胞G2-M期阻滞作用.同时,TUNEL法检测到Gadd45诱导的细胞凋亡,Western印迹检测观察到PARP和半胱氨蛋白水解酶3蛋白质剪切激活.结论 Gadd45高表达可以抑制HCT116细胞生长,其机理主要是通过Gadd45诱导细胞G2-M期阻滞和激活细胞凋亡途径起作用.
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