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慢性炎症性疾病多伴机体免疫功能紊乱，具有经久难治、发病率高、易反复发作等特点，给患者带来极大的痛苦。抗炎免疫药理学认为炎症反应长期性的基础是局部免疫反应的持续存在[1]。我国学者近年提出，炎症和免疫相互重叠不可分割，二者在组织、细胞、分子水平之间有着紧密的联系。在治疗慢性炎症免疫紊乱性疾病时，仅仅单独应用抗炎药/免疫抑制药/免疫增强药，疗效均不佳，长期应用还可能加重病程发展。因此寻找新的治疗方法是十分迫切需要研究的课题。传统中药具有毒副作用小、药用价值高的优点，在治疗慢性炎症性疾病方面具有明显的优势。但由于中药成分复杂，如何发现有效的药用成分是亟待解决的难题。
1传统中药药效物质基础研究的局限性
传统药效物质基础研究方法，一般仅限于植化提取分离和提取部位的初步药理观察，或是在分离得到单体成分后再做活性筛选，带有很大的盲目性，有的研究甚至在不知道粗提物口服后，其中某一单体化学成分是否进入体内的情况下，就将该单体直接作为质控指标，或者直接进行体外实验，几乎未涉及到药物的体内过程。十分不利于传统中药的发展和深入研究。
2中药指纹图谱与谱-效关系研究
对于成分复杂的中药，中药指纹图谱技术正发挥着越来越重要的质量监控作用。虽然指纹图谱技术能基本反映中药的化学成分与含量的分布情况，但无法从指纹图谱中解析某一峰或某一段峰所代表的药理作用。“谱-效关系”作为指纹图谱发展的高级阶段，将标示物质群特征峰的中药指纹图谱与药效结果相对应起来，可对指纹图谱中与药效有关的信息进行判别，有利于反映各指纹峰的药效活性，确定主要活性峰，从而获取中药体内的活性物质。“谱-效关系”从化学与效应相关的角度探查化学部位与效用的关系，反应了中药的物质基础本质，较好解决了体现中药整体性和复杂性的难题，是中药现代化、国际化的关键环节 [2-3]。
3 血清药理学与血清谱-效关系
3.1 血清药理学与中药研究
植化粗提物口服后经消化液和肠内菌群代谢，或未被吸收（如某些高分子化合物）而排泄出体外；或吸收至肝、经肝酶转化，再进入血液循环，直接产生药理效应；有的再通过第二信使而间接地产生作用。这些体内作用过程都能够被经过生物转化后的药物血清真实的反映出来[4]。血清药理学认为，口服中药（非胃肠道局部作用）化学成分只有进入血液才有可能成为有效成分，最终输送至靶器官而发挥药理效应，通过分析口服给药后血清中成分，能够快速、准确的确定中药及复方的体内直接作用物质[5]。
3.2 血清谱-效关系
3.2.1 血清谱-效关系研究，一般以含药血清为研究重点，关注血中移行成分，考察中药有效部位给药后血清指纹图谱与免疫调节活性的经时变化规律，分析其相关性，大大缩小了研究范围，锁定了研究目标。
3.2.2 用含药血清代替煎剂或粗提物进行体外实验，可防止中药粗提制剂本身理化性质对实验的干扰，更接近于药物在体内产生效应的内环境，代表了药物在体内产生作用的真正有效成分，具有更强的可信性和科学性。
3.2.3 通过探查影响药效的主要组分或成分，分离鉴定含药血清中的有效成分，将有限的人力物力有的放矢的投入到实验中，有利于提高实验的效率。
4 血清谱-效关系在慢性炎症性疾病中的研究方法
4.1 含药血清的制备及其对免疫炎症因子的影响研究（1）动物给药后在不同时间点采血，为减少个体间差异，应选用同一动物作自身对照。（2）为减少体外反应系统中的药物浓度与体内血药浓度的差异，一般应将血清制成冻干粉。由于空白血清本身活性可能对实验产生干扰，故体外实验中除设立空白对照组（生理盐水）外，还应设立空白血清对照组。（3）需要研究不同剂量、给药天数的含药血清对免疫因子活性的影响
4.2 建立时-效曲线和药-时曲线（1）根据不同时相的含药血清对免疫因子活性的影响，建立时-效曲线；（2）根据中药不同时相的含药血清指纹图谱，将之与指纹图谱以及空白血清图谱比较分析，确定其中的原形谱峰和新增谱峰，观测其各成分的峰面积相对于时间的变化规律，以各色谱峰峰面积为纵坐标，以各时间点为横坐标，建立血清中各成分的药-时曲线。
4.3 指纹图谱与药效的相关性分析 根据建立的时-效曲线和药-时曲线，分析不同时相含药血清指纹图谱与其免疫调节药效的相关性，探查影响药效的主要组分或成分。
4.4药效物质基础分析
4.4.1含药血清中相对应的原形谱峰 由于是原形谱峰，故可直接分离有效部位。以避免血清的干扰及其对色谱柱的损害。①易于分离、含量高的药效成分：直接应用HPLC制备色谱法在线分离。②难于分离、含量低的药效成分：拟采用制备型高速逆流色谱（HSCCC）/大孔吸附树脂柱色谱/硅胶柱色谱/RP-C18柱制备色谱等现代技术，分离纯化有效部位，选用TLC/UV/HPLC等示蹤。
4.4.2含药血清中的新增谱峰 ①分离度大、含量高的药效成分：直接应用HPLC制备色谱法在线分离。②分离度小的药效成分 先用HPLC制备色谱法分离，合并分离液，低温浓缩，根据分子量大小、理化性质等的不同，应用sephadex凝胶色谱柱等其他中药现代纯化分离技术进行分离。③含量低的药效成分 可采用以下方法，增大该药效成分色谱峰面积：A.增大采血量；B.在峰面积相对较大的时相采血；C.增加含药血清进样量等。
5 讨论
借助血清药理学/血清化学、药效/药代动力学等现代技术方法，以含药血清免疫调节因子活性的作为研究指标，考察中药给药后血清指纹图谱与免疫调节活性的经时变化规律，分析其相关性，探查影响药效的主要组分或成分，分离鉴定含药血清中的有效成分，有利于阐明中药发挥抗炎免疫调节作用的物质基础，使传统中药在慢性炎症性疾病中发挥更为重要的作用。
参考文献：
[1].徐叔云. 抗炎免疫药理学研究十年进展[J]，中国药理学通报，1996，12（1）：126
[2].Wang N，Li P，Wang Y，et a1.Hepatoprotective effect of Hypericum japonicum extract and its fractions[J].J Ethnopharmacol. 2008，116（1）：1-6.
[3].于荣敏，赵昱.现代生物技术方法在中药现代化中的应用[M].北京：中国医药科技出版社，2005：28
[4].Bochu W，Liancai Z，Qi C.Primary study on the application of Serum Pharmacology in Chinese traditional medicine[J].Colloids Surf B Biointerfaces，2005，43（3-4）：194-197.
[5]贺玉琢.日本汉方药血清药理学、血清药化学的研究概况[J].国外医学中医中药分册，1998，20（5）：3-7
作者简介：华小黎，女，硕士，主管药师，研究方向：医院药学、中药学；王新桂，女，学士，主管药师，研究方向：中药学。
1传统中药药效物质基础研究的局限性
传统药效物质基础研究方法，一般仅限于植化提取分离和提取部位的初步药理观察，或是在分离得到单体成分后再做活性筛选，带有很大的盲目性，有的研究甚至在不知道粗提物口服后，其中某一单体化学成分是否进入体内的情况下，就将该单体直接作为质控指标，或者直接进行体外实验，几乎未涉及到药物的体内过程。十分不利于传统中药的发展和深入研究。
2中药指纹图谱与谱-效关系研究
对于成分复杂的中药，中药指纹图谱技术正发挥着越来越重要的质量监控作用。虽然指纹图谱技术能基本反映中药的化学成分与含量的分布情况，但无法从指纹图谱中解析某一峰或某一段峰所代表的药理作用。“谱-效关系”作为指纹图谱发展的高级阶段，将标示物质群特征峰的中药指纹图谱与药效结果相对应起来，可对指纹图谱中与药效有关的信息进行判别，有利于反映各指纹峰的药效活性，确定主要活性峰，从而获取中药体内的活性物质。“谱-效关系”从化学与效应相关的角度探查化学部位与效用的关系，反应了中药的物质基础本质，较好解决了体现中药整体性和复杂性的难题，是中药现代化、国际化的关键环节 [2-3]。
3 血清药理学与血清谱-效关系
3.1 血清药理学与中药研究
植化粗提物口服后经消化液和肠内菌群代谢，或未被吸收（如某些高分子化合物）而排泄出体外；或吸收至肝、经肝酶转化，再进入血液循环，直接产生药理效应；有的再通过第二信使而间接地产生作用。这些体内作用过程都能够被经过生物转化后的药物血清真实的反映出来[4]。血清药理学认为，口服中药（非胃肠道局部作用）化学成分只有进入血液才有可能成为有效成分，最终输送至靶器官而发挥药理效应，通过分析口服给药后血清中成分，能够快速、准确的确定中药及复方的体内直接作用物质[5]。
3.2 血清谱-效关系
3.2.1 血清谱-效关系研究，一般以含药血清为研究重点，关注血中移行成分，考察中药有效部位给药后血清指纹图谱与免疫调节活性的经时变化规律，分析其相关性，大大缩小了研究范围，锁定了研究目标。
3.2.2 用含药血清代替煎剂或粗提物进行体外实验，可防止中药粗提制剂本身理化性质对实验的干扰，更接近于药物在体内产生效应的内环境，代表了药物在体内产生作用的真正有效成分，具有更强的可信性和科学性。
3.2.3 通过探查影响药效的主要组分或成分，分离鉴定含药血清中的有效成分，将有限的人力物力有的放矢的投入到实验中，有利于提高实验的效率。
4 血清谱-效关系在慢性炎症性疾病中的研究方法
4.1 含药血清的制备及其对免疫炎症因子的影响研究（1）动物给药后在不同时间点采血，为减少个体间差异，应选用同一动物作自身对照。（2）为减少体外反应系统中的药物浓度与体内血药浓度的差异，一般应将血清制成冻干粉。由于空白血清本身活性可能对实验产生干扰，故体外实验中除设立空白对照组（生理盐水）外，还应设立空白血清对照组。（3）需要研究不同剂量、给药天数的含药血清对免疫因子活性的影响
4.2 建立时-效曲线和药-时曲线（1）根据不同时相的含药血清对免疫因子活性的影响，建立时-效曲线；（2）根据中药不同时相的含药血清指纹图谱，将之与指纹图谱以及空白血清图谱比较分析，确定其中的原形谱峰和新增谱峰，观测其各成分的峰面积相对于时间的变化规律，以各色谱峰峰面积为纵坐标，以各时间点为横坐标，建立血清中各成分的药-时曲线。
4.3 指纹图谱与药效的相关性分析 根据建立的时-效曲线和药-时曲线，分析不同时相含药血清指纹图谱与其免疫调节药效的相关性，探查影响药效的主要组分或成分。
4.4药效物质基础分析
4.4.1含药血清中相对应的原形谱峰 由于是原形谱峰，故可直接分离有效部位。以避免血清的干扰及其对色谱柱的损害。①易于分离、含量高的药效成分：直接应用HPLC制备色谱法在线分离。②难于分离、含量低的药效成分：拟采用制备型高速逆流色谱（HSCCC）/大孔吸附树脂柱色谱/硅胶柱色谱/RP-C18柱制备色谱等现代技术，分离纯化有效部位，选用TLC/UV/HPLC等示蹤。
4.4.2含药血清中的新增谱峰 ①分离度大、含量高的药效成分：直接应用HPLC制备色谱法在线分离。②分离度小的药效成分 先用HPLC制备色谱法分离，合并分离液，低温浓缩，根据分子量大小、理化性质等的不同，应用sephadex凝胶色谱柱等其他中药现代纯化分离技术进行分离。③含量低的药效成分 可采用以下方法，增大该药效成分色谱峰面积：A.增大采血量；B.在峰面积相对较大的时相采血；C.增加含药血清进样量等。
5 讨论
借助血清药理学/血清化学、药效/药代动力学等现代技术方法，以含药血清免疫调节因子活性的作为研究指标，考察中药给药后血清指纹图谱与免疫调节活性的经时变化规律，分析其相关性，探查影响药效的主要组分或成分，分离鉴定含药血清中的有效成分，有利于阐明中药发挥抗炎免疫调节作用的物质基础，使传统中药在慢性炎症性疾病中发挥更为重要的作用。
参考文献：
[1].徐叔云. 抗炎免疫药理学研究十年进展[J]，中国药理学通报，1996，12（1）：126
[2].Wang N，Li P，Wang Y，et a1.Hepatoprotective effect of Hypericum japonicum extract and its fractions[J].J Ethnopharmacol. 2008，116（1）：1-6.
[3].于荣敏，赵昱.现代生物技术方法在中药现代化中的应用[M].北京：中国医药科技出版社，2005：28
[4].Bochu W，Liancai Z，Qi C.Primary study on the application of Serum Pharmacology in Chinese traditional medicine[J].Colloids Surf B Biointerfaces，2005，43（3-4）：194-197.
[5]贺玉琢.日本汉方药血清药理学、血清药化学的研究概况[J].国外医学中医中药分册，1998，20（5）：3-7
作者简介：华小黎，女，硕士，主管药师，研究方向：医院药学、中药学；王新桂，女，学士，主管药师，研究方向：中药学。