【摘 要】
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利用P.pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白.设计特定引物从全长hZP3 cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列;扩增片段
【基金项目】
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广东省自然科学基金项目 (No.3 1883 );广东省科技计划项目 (No .2 0 0 3B3 0 5 0 1)资助~~
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利用P.pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白.设计特定引物从全长hZP3 cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列;扩增片段插入表达载体pPIC9K中;线性化后的重组质粒转入P.pastoris中,用高浓度G418筛选高拷贝菌株,然后甲醇诱导目的蛋白表达.用SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.结果发现P.pastoris表达的人ZP3蛋白可以分泌到培养液中,并且可溶性好.纯化前后的重组人ZP3蛋白均能与兔抗猪ZP3蛋白抗体
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