目的 探讨湖南省多重耐药(multi-drug resistance,MDR)铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa,Pa)中4种外排泵表达的分布和作用,以及相关调控基因的突变情况.方法 收集2008年湖南省临床首次分离非重复多重耐药Pa株40株,以外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺及4种药敏纸片进行外排泵表型初步筛选,PCR扩增膜融合蛋白基因及相关外排泵调控基因并测序;以18组非多重耐药菌株为对照研究分析Pa外排泵基因表达在多重耐药中的作用.结果 表型筛选MDR组菌株MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-oprN、MexXY-OprM阳性率分别为45.0%(18/40)、30.0%(12/40)、42.5%(17/40)、12.5%(5/40);RT-PCR显示mexA、mexC、mexE和mexX表达阳性率分别为100%(58/58)、22.5%(9/40),45.0%(18/40)和22.5%(9/40).Real-time PCR半定量分析菌株超表达mexA和mexX阳性率分别为55.0%(22/40)和22.5%(9/40).非多重耐药组中,mexA与mexX real-time PCR超表达阳性率均为0(0/18).mexC和mexE RT-PCR表达阳性率分别为11.1%(2/18)、38.9%(7/18).两组相比,mexA与mexX超表达差异有统计学意义(P<0.001,P=0.045).随机挑选超表达mexA菌株Pa20出现mexR的164GTG→GAG、126Val→Gh替代;超表达mexX菌株Pa34出现mexZ的164GCG→GAG、55Ala→Glu.结论 湖南省多重耐药Pa株大多存在主动外排的耐药机制,其耐药与外排基因Mex-AB-OprM和MexXY-OprM超表达有关.主动外排泵MexAB-OprM和MexXY-OprM超表达大多存在其调控基因突变。