【摘 要】
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为简化定向进化筛选突变耐高温和耐酸碱酶等极端酶的繁复工作,建立了一种快速质粒营救法,可直接从加热处理的平板中回收携带有突变基因的质粒,用于进一步的随机突变基因的筛
【机 构】
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河南省南阳师范学院生命科学与技术学院,湖北大学生命科学学院
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.30760009);河南省教育厅自然科学研究计划项目(2008B80010);湖北省教育厅重点课题(D20081004)资助
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为简化定向进化筛选突变耐高温和耐酸碱酶等极端酶的繁复工作,建立了一种快速质粒营救法,可直接从加热处理的平板中回收携带有突变基因的质粒,用于进一步的随机突变基因的筛选和基因测序等。研究了在不同的热处理条件下的质粒营救效率,获得了质粒营救转化效率最高的处理条件。结果表明,本方法适于质粒大小在2~10 kb范围的载体,可用于平板筛选最适酶活性温度在60~100℃、pH 4~10的突变体酶,并可将一轮的筛选过程缩短1~2 d。
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