【摘 要】
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目的 探究微小RNA-155(miR-155)在结肠炎相关结肠癌发生过程中的作用并初步筛选其下游的靶基因.方法 联合应用氧化偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导C57BL/6小鼠发生结肠炎相关结肠癌,得到从结肠炎到结肠癌的3个不同阶段的小鼠模型(分别命名为AD1、AD2和AD3),同时设立无任何处理的对照组和只给予DSS来模拟慢性炎症的DSS组,取各组小鼠的结肠组织提取总RNA,逆转录成
【机 构】
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(100021北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室),(100021北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室),(100021北京协和医
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目的 探究微小RNA-155(miR-155)在结肠炎相关结肠癌发生过程中的作用并初步筛选其下游的靶基因.方法 联合应用氧化偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导C57BL/6小鼠发生结肠炎相关结肠癌,得到从结肠炎到结肠癌的3个不同阶段的小鼠模型(分别命名为AD1、AD2和AD3),同时设立无任何处理的对照组和只给予DSS来模拟慢性炎症的DSS组,取各组小鼠的结肠组织提取总RNA,逆转录成cDNA后应用实时荧光定量PCR检测miR-155的表达.结合前期的全基因组表达谱芯片数据和miRNA靶基因预测软件TargetScan和PicTar预测出来的潜在靶基因,初步筛选miR-155的下游靶基因,并用PCR进一步验证潜在靶基因的表达变化.结果 ADM和DSS联合使用能有效地模拟人类结肠炎相关结肠癌,结肠炎相关结肠癌的演变顺序为正常、轻度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生和腺癌.DSS组小鼠结肠miR-155的表达水平(0.005 6±0.003 7)与对照组(0.0120±0.005 1)比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而AD3组小鼠的miR-155表达水平(0.054 4±0.027 0)高于DSS组(0.005 6±0.003 7),差异有统计学意义(P＜0.01).结合全基因组表达谱芯片和miRNA靶基因预测软件,初步筛选出miR-155可能的下游靶基因为Tie4、Kcna1、Itk、Bcorl1、Cacna1c、Rspo2和Foxo3,其中Kcna1和Cacna1c经PCR验证与芯片检测结果一致.结论 miR-155的表达升高与结肠炎相关结肠癌有关,而与慢性炎症无关.
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