【摘 要】
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目的 探讨猫眼综合征临界区基因(CECR)7小干扰RNA(si-CECR7)联合紫杉醇对肝癌耐药细胞Huh-7/ADM恶性行为的影响及机制.方法 将不同浓度(12.5、25.0、50.0、100.0μg/ml)紫杉醇作用于Huh-7和Huh-7/ADM细胞48 h,MTT检测细胞抑制率,比较紫杉醇对Huh-7、Huh-7/ADM细胞的半数抑制浓度(IC50).qRT-PCR检测肝癌组织和Huh-7、Huh-7/ADM细胞中CECR7表达.转染si-CECR7或共转染si-CECR7和miR-197抑制剂(
【机 构】
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濮阳医学高等专科学校基础医学部,河南 濮阳 457000;濮阳市人民医院风湿内科
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目的 探讨猫眼综合征临界区基因(CECR)7小干扰RNA(si-CECR7)联合紫杉醇对肝癌耐药细胞Huh-7/ADM恶性行为的影响及机制.方法 将不同浓度(12.5、25.0、50.0、100.0μg/ml)紫杉醇作用于Huh-7和Huh-7/ADM细胞48 h,MTT检测细胞抑制率,比较紫杉醇对Huh-7、Huh-7/ADM细胞的半数抑制浓度(IC50).qRT-PCR检测肝癌组织和Huh-7、Huh-7/ADM细胞中CECR7表达.转染si-CECR7或共转染si-CECR7和miR-197抑制剂(anti-miR-197)至Huh-7/ADM细胞,然后再用12.5μg/ml紫杉醇干预48 h,MTT检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、E-cadherin和MMP-2蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证CECR7与miR-197调控关系.结果 Huh-7/ADM细胞对紫杉醇的IC50值为161.00μg/ml,约是Huh-7细胞(24.10μg/ml)的6.7倍.肝癌组织中CECR7表达显著高于癌旁组织(P<0.05).Huh-7/ADM细胞中CECR7表达显著高于Huh-7细胞(P<0.05).si-CECR7联合紫杉醇显著降低了Huh-7/ADM细胞存活率、克隆数、迁移数、侵袭数及CyclinD1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达(P<0.05),而显著提高细胞凋亡率、P21、E-cadherin和Bax蛋白表达(P<0.05).CECR7靶向结合并负调控miR-197.anti-miR-197逆转si-CECR7联合紫杉醇对Huh-7/ADM细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.结论 si-CECR7联合紫杉醇降低Huh-7/ADM细胞的恶性行为,这可能与敲减CECR7导致细胞中miR-197表达上调有关.
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