【摘 要】
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目的:建立基于报告基因的组胺H3受体(H3R)激活剂的高通量筛选模型,用此模型对收集到的中草药化合物组分进行筛选,以发现新的组胺H3R激活剂。方法将H3R基因质粒(H3R/pCDNA3.1-
【机 构】
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中国科学院北京基因组研究所,中国科学院研究生院,上海华大天源生物科技有限公司
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目的:建立基于报告基因的组胺H3受体(H3R)激活剂的高通量筛选模型,用此模型对收集到的中草药化合物组分进行筛选,以发现新的组胺H3R激活剂。方法将H3R基因质粒(H3R/pCDNA3.1-hygro)与报告基因质粒(3XCRE-LUC)按3∶1的比例共转染入HEK293细胞,建立了稳定的H3R配体的报告基因筛选细胞株。激活剂与细胞表面H3R结合后,激活相应的信号通路,调节Forskolin刺激后的报告基因的表达,通过测定荧光素酶报告基因表达水平的变化,评估激活剂影响H3受体的生物活性。结果通过对筛选条件,如激活剂孵育时间、Forskolin终浓度、化合物溶剂的选择、溶剂DMSO终浓度等的优化,建立了可靠的筛选方法。该模型的Z因子可达到0.5以上,稳定性可保持20代,完全符合高通量筛选需求。利用该细胞模型对多种中草药萃取物进行了筛选,找到了两种对H3R有活性的中药组分。结论建立的细胞模型可以有效的应用于以组胺H3受体为靶点的高通量药物筛选。
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