【摘 要】
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我们发现S100A8和S100A9蛋白质不仅在鼻咽癌患者血浆中水平高于健康人,而且在鼻咽癌组织及培养细胞中也存在高表达。本研究的目的是在鼻咽癌细胞中克隆S100A8和S100A9基因并
【机 构】
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广西壮族自治区疾病预防控制中心,广西医科大学生物化学与分子生物学教研室,广西医科大学医学科学实验中心,
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我们发现S100A8和S100A9蛋白质不仅在鼻咽癌患者血浆中水平高于健康人,而且在鼻咽癌组织及培养细胞中也存在高表达。本研究的目的是在鼻咽癌细胞中克隆S100A8和S100A9基因并构建表达质粒和在鼻咽癌细胞中表达,为内源性S100A8和S100A9蛋白质与鼻咽癌发生发展的关系研究奠定基础。PCR扩增目的基因S100A8和S100A9片段,将其插入载体p Bud CE4.1构建S100A8-S100A9-p Bud CE4.1表达质粒,经双酶切、PCR及测序鉴定后转染至人鼻咽癌细胞系(CNE1)进行表达并用Real time-PCR及Western Blot进行检测。PCR、双酶切和测序结果显示,S100A8和S100A9氨基酸序列无变异(S100A8有1个碱基突变),表达质粒S100A8-S100A9-p Bud CE4.1构建正确。Real Time-PCR和Western Blot结果显示,S100A8和S100A9基因在CNE1中正确转录与表达。成功克隆S100A8和S100A9基因并构建S100A8-S100A9-p Bud CE4.1表达质粒且可在鼻咽癌细胞中稳定表达。
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